Введение
1. Введение 5
2. Обзор литературы 11
2.1. Кардиотоксическое действие антрациклиновых антибиотиков 11
2.1.1. Общая характеристика и фармакологические свойства антрациклиновых антибиотиков 11
2.1.2. Механизмы кардиотоксического действия доксорубицина 13
2.1.3. Разработка подходов для снижения кардиотоксического действия доксорубицина 24
2.1.4. Клеточные модели для исследования кардиотоксического действия доксорубицина 28
2.2. Система поли(АДФ-рибозил)ирования белков 31
2.2.1. Поли(АДФ-рибозил)ирование белков – универсальный механизм регуляции клеточных процессов 31
2.2.2 Структура и регуляция активности PARP-1 34
2.2.3. Роль PARP-1 в репарации ДНК 37
2.2.4. Роль PARP-1 в механизмах гибели клетки 41
2.2.5. Структура и функции PARP-2 45
2.3. Ингибиторы PARP 46
2.3.1. Первое поколение ингибиторов PARP – производные никотинамида и бензамида 47
2.3.2. Ингибиторы PARP второго поколения 48
2.3.3. Ингибиторы PARP третьего поколения 50
2.3.4. Селективные ингибиторы поли(АДФ-рибоза)-полимераз 52
2.3.5. Ингибиторы PARP нуклеозидной природы 55
2.4. Ингибиторы PARP – новая группа фармакологических веществ 56
2.4.1. Применение ингибиторов PARP в монотерапии опухолей 57
2.4.2. Применение ингибиторов PARP в качестве
адъювантного средства при терапии опухолей 59
2.4.3. Фармакологические эффекты ингибиторов PARP
при сердечно-сосудистых патологиях 61
3. Материалы и методы исследования 63
3.1. Используемые реактивы и материалы 63
3.2. Культуры клеток 63
3.2.1. Кардиомиобласты крысы Н9с2 63
3.2.2. Кардиомиоциты из новорожденных крыс 64
3.2.3. Клетки опухоли яичника человека SKOV-3 65
3.2.4. Фибробласты человека 66
3.3. Методы исследования 66
3.3.1. Подготовка планшетов для культивирования кардиомиоцитов 66
3.3.2. Обработка культур доксорубицином и другими веществами при оценке их влияния на жизнеспособность клеток
3.3.3. Определение жизнеспособности клеток в культуре с применением МТТ-теста 67
3.3.4. Флуоресцентная микроскопия 68
3.3.5. Анализ ДНК-комет 72
3.3.6. Анализ фрагментации ДНК методом электрофореза 74
3.3.7. Анализ PARP-ингибирующей активности соединений в культуре клеток 75
3.3.8. Статистический анализ данных 75
4. Результаты и обсуждение 76
4.1. Характеристика используемых в работе культур кардиомиоцитов 76
4.2. Токсическое действие доксорубицина на культивируемые кардиомиоциты
4.2.1. Накопление доксорубицина в культивируемых кардиомиоцитах 78
4.2.2. Чувствительность кардиомиоцитов к действию доксорубицина
4.3. Влияние доксорубицина на уровень PAR в клетках Н9с2 86
4.4. Влияние ингибиторов поли(АДФ-рибоза)полимераз на кардиотоксичность доксорубицина 92
4.5. Влияние антиоксидантов и ингибитора NO-синтазы на кардиотоксичность доксорубицина 4.5.1. Влияние ингибитора NO-синтазы на кардиотоксичность доксорубицина 98
4.5.2. Влияние антиоксидантов на кардиотоксичность доксорубицина 101
4.6. Повреждение и фрагментация ДНК при кардиотоксическом действии доксорубицина 108
4.7. Внутриядерное накопление AIF в кардиомиоцитах при воздействии доксорубицина 114
4.8. Влияние ингибиторов PARP на стимулируемую доксорубицином гибель клеток опухоли яичника человека SKOV-3 116
4.9. Дисахаридные и диальдегидные производные пиримидиновых нуклеозидов – потенциальные ингибиторы PARP
4.9.1. Ингибирование рекомбинантной PARP-1 человека аналогами нуклеозидов 121
4.9.2. Ингибирование PARP человека аналогами нуклеозидов в культуре клеток 123
4.9.3. Влияние синтетических производных нуклеозидов – ингибиторов PARP на цитотоксичность доксорубицина в отношении кардиомиоцитов и опухолевых клеток 127
5. Заключение 130
6. Выводы 136
7. Список литературы
