Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Общая характеристика микоплазм 12
1.1.1. Таксономия, филогения и эволюция 12
1.1.2. Клеточная и молекулярная биология 17
1.1.2.1. Морфология и ультраструктура 17
1.1.2.2. Среда и условия обитания микоплазм 21
1.1.2.3. Геном и его экспрессия 26
1.2. Микоплазмы и микоплазмозы: взаимодействие микоплазм с растениями 30
1.2.1. Особенности морфозов при инфицировании растений микоплазмами 30
1.2.2. Микоплазменные инфекции растений: молекулярно-генетические, биохимические и ультрацито-структурные особенности 32
1.3. Патогенность, диагностика и подавление микоплазменных инфекций: проблемы и перспективы 38
1.4. Адаптация бактерий к неблагоприятным условиям роста: морфология, биохимия, ультрацитоструктура и патогенность 41
Экспериментальная часть 53
Глава 2. Материалы и методы 53
2.1. Культивирование микоплазм (Acholeplasma laidlawii PG8) 53
2.2. Оценка количества жизнеспособных клеток A.laidlawii PG8 54
2.3. Инфицирование растений (Pisum sativum L., Vinca minor L.) клетками A.laidlawii PG8 55
2.4. Приготовление проб для электронной микроскопии \56
2.5. Определение активности СОД в тканях растений 57
2.6. Определение концентрации конъюгированных диенов в тканях растений 57
2.7. Определение концентрации нитритов в тканях растений 58
2.8. Выделение ДНК из клеток микоплазм, очистка и секве-нирование 58
2.9. Выделение и очистка тотальной ДНК из клеток растений 59
2.10. Электрофорез ДНК в агарозном геле 60
2.11. Амплификация фрагментов ДНК A.laidlawii PG8 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) 61
2.12. Получение культур A.laidlawii PG8, адаптированных к неблагоприятным условиям роста 62
2.13. Определение устойчивости клеток A.laidlawii PG8 к стрессовым воздействиям 63
2.13.1. Определение устойчивости к воздействию перекиси водорода 63
2.13.2. Определение термоустойчивости 63
2.14. Разделение белков клеток A.laidlawii PG8 методом двумерного электрофореза 63
2.15. Электрофорез ДНК-связанных белков в ПААГ 64
2.16. Статистическая обработка данных 65
2.17. Сравнение частоты выявления морфологических отклонений у контрольных и опытных растений V.minor L. 65
Глава 3. Результаты и их обсуждение 68
3.1. Фитопатогенность штамма A laidlawii PG8 68
3.1.1. Инфицирование растений A.laidlawii PG8: способы и контроль заражения 69
3.1.2. Контроль инфицируемости растений A.laidlawii PG8 с помощью ПЦР 70
3.1.3. Морфологические особенности растений (P.sativum L.), инфицированных A.laidlawii PG8 72
3.1.4. Особенности ультраструктуры тканей растений, инфицированных A.laidlawii PG8 73
3.1.5. Реактивность неспецифических сигнальных систем у растений, инфицированных A. laidlawii PG8 79
3.1.5.1. Содержание коньюгированных диенов в тканях исследуемых растений 81
3.1.5.2. Активность СОД и содержание нитритов в тканях инфицированных растений 83
3.2. Адаптация A.laidlawii PG8 к неблагоприятным условиям роста 87
3.2.1. Жизнеспособность A.laidlawii PG8 в условиях голодания 87
3.2.2. Влияние воздействия теплового шока и перекиси водорода на жизнеспособность контрольных и опытных культур A.laidlawii PG8 93
3.3. Морфологические, ультраструктурные, биохимические и молекулярно-генетические особенности клеток культуры A.laidlawii PG8, адаптированной к неблагоприятным условиям роста 95
3.4. Фитопатогенность клеток культуры A.laidlawii PG8, адаптированной к неблагоприятным условиям роста 115
Заключение 122
Выводы 126
Список литературы
