Введение
1 Дифференцировка и созревание В-лимфоцитов 10
2 Плазматические клетки и UPR (Unfolded Protein Response) 14
3 Механизмы транспорта белков из ЭР в аппарат Гольджи. 15
4 Рецепторы лейкоцитов и сигнальная трансдукция. 18
5 Лейкоцитарные Fc-рецепторы человека 21
6 FcR-подобные рецепторы человека 22
7 Характеристика внутриклеточного члена семейства FCRL - FCRLA 26
8 Связь FcR-подобных белков с истощением цитотоксических Т-лимфоцитов 28
8.1 Общая характеристика патологий, связанных с истощением цитотоксических Т-лимфоцитов 28
8.2 Ингибирующие рецепторы ЦТЛ, и их роль в патогенезе 29
8.3 FCRL6 - новый потенциально ингибирующий рецептор 33
2. Материалы и методы 35
2.1. Материалы и реактивы 35
2.2. Биологические материалы 36
2.3. Работа с эукариотическими клетками 36
2.3.1. Культивация эукариотических клеток 36
2.3.2. Выделение периферических мононуклеарных клеток крови 36
2.3.4 Химическая трансфекция эукариотических клеток. 37
2.4. Клонирование ДНК. 37
2.5 Выделение РНК и синтез кДНК 37
2.6 Электрофорез белков 39
2.6.1. Гель-электрофорез белков (ДСН-ПААГ) (Laemmli, 1970) 39
2.6.2. Синий нативный гель-электрофорез белковых комплексов (НC ПААГ). (по Shagger, 1991) 39
2.6.3. Гель-электрофорез белков (ДСН-ПААГ) во втором измерении, после СН-ПААГ 39
4 2.6.4. Окрашивание гелей при помощи нитрата серебра (по Shagger, 2006) 40
2.7. Иммуноферментный анализ (ИФА) (под ред. Фримеля, 1987) 40
2.8. Иммуноблоттинг 40
2.9. Иммунофлуоресцентной окрашивание и микроскопия 41
2.10 Дегликозилирование белков 42
2.11 Выделение микросом из клеток Bjab или лейкоцитов миндалины. 42
2.12 Мутагенез, с использованием мегапраймера по (Sarkar, 1990) 43
2.13 Аффинная очистка FCRLA-содержащих комплексов при помощи моноклональных антител. 43
2.14 Выделение FCRLA-содержащих комплексов при помощи тандемной аффинной очистки. 43
2.15 Масс-спектрометрический анализ белков FCRLA-содержащего комплекса. 44
2.16 Измерениие относительного уровня экспрессии РНК FCRL6 методом
RealTime PCR. 44
2.17 Анализ белков взаимодействующих с цитоплазматической частью FCRL6. 45
2.18 Анализ коэкспрессии FCRL6 с другими поверхностными маркерами методом проточной цитометрии . 46
3. Результаты и обсуждение 48
3.1 Изучение функциональной активности изоформ FCRLA 48
3.1.1 Анализ экспрессии изоформ FCRLA 48
3.1.2 Исследование внутриклеточной локализации изоформ FCRLA 51
3.1.4 Исследование статуса гликозилирования изоформ FCRLA. 54
3.1.5 Сигнальный пептид отщепляется в процессе созревания большинства изоформ FCRLA. 55
3.1.6 Характер взаимодействия четырехдоменной изоформы FCRLA с мембраной ЭР. 59
3.1.7 Идентификация участка FCRLA, определяющего его локализацию в ЭР. 60
3.1.8 Определение молекулярной массы FCRLA-содержащего комплекса . 64
3.1.9 Взаимодействие FCRLA с иммуноглобулинами. 65
3.1.10 Поиск белков, взаимодействующих с FCRLA. 67
3.1.11 Обсуждение роли FCRLA в клетке. 69
3.2 Изучение функциональных свойств рецептора лимфоцитов человека FCRL6 71
3.2.1 Сигнальные свойства FCRL6 на модели in vitro. 71
3.2.2 Экспрессия FCRL6 при ВИЧ инфекции 73
Выводы 79
Список литературы 80
Приложение 94
