Введение
2. Обзор литературыГенетический контроль метаболизма азота и углерода у дрожжей 10
2.1. Метаболизм азота у дрожжей и механизмы его регуляции 10
2.2. Регуляция метаболизма углерода у дрожжей S. cerevisiae и P. pastoris 19
2.3. Взаимодействие сигнальных путей, вовлеченных в регуляцию азотного и углеродного метаболизма 40
2.4. Метаболизм фосфора у дрожжей S. cerevisiae и механизмы его регуляции 42
3. Материалы и методы 45
3.1. Среды и условия культивирования 45
3.2. Плазмиды 46
3.3. Штаммы дрожжей и бактерий 48
3.4. Олигонуклеотиды 49
3.4. Методы 52
4. Результаты и обсуждение 60
4.1 Изучение влияния разных типов источников азота и углерода на рост штамма GS115 P. pastoris 60
4.2 Влияние источников азота на экспрессию генов метаболизма метанола 63
4.3 Изучение регуляции промоторов генов АОХ1 и АОХ2 в зависимости от типа источника азота 65
4.4 Влияние ингибитора TOR-киназы рапамицина на уровень активности промотора гена АОХ1 72
4.5 Получение штаммов P. pastoris устойчивых к рапамицину 76
4.6 Влияние делеции в гене PpURE2 на регуляцию промотора гена AOX1 80
4.7 Пролин и глутамат как комплексные источники азота и углерода для P. pastoris 85
4.8 Делеционный анализ промотора гена AOX1 87
4.9 Изучение экспрессии гена АОХ1 в популяции клеток P. pastoris 95
4.10 Анализ активности промотора гена АОХ1 P. pastoris с использованием дрожжей S. сerevisiae 100
4.11 Влияние концентрации фосфата в среде на активность промоторов генов АОХ1 и АОХ2 103
4.12 Изучение влияния концентрации ортофосфата на экспрессию генов DAS, FLD, DAK, PpPEX5 105
4.13 Анализ влияния делеций в промоторе гена АОХ1 на его регуляцию фосфатом 107
4.14 Влияние ингибитора циклинзависимых киназ флавопиридола на уровень активности промотора гена АОХ1 109
4.15 Оптимизация условий культивирования штаммов P. pastoris 111
5. Заключение 117
6. Выводы 122
7. Список используемых сокращений 123
8. Список цитируемой литературы 124
