Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 16
1.1. Колоректальный рак 16
1.2. Кишечная микрофлора и их вклад в патогенез онкологических заболеваний 19
1.3. Возможные механизмы участия кишечной флоры в развитии колоректального рака 26
1.3.1. Индукция воспалительных процессов микрофлорой кишечника 27
1.3.2. Бактериальные токсины и их роль в возникновении колоректального рака 30
1.4. Генетическая обусловленность факторов вирулентности бактерий 35
1.5. Факторы микробного происхождения в предотвращение развития опухолей 37
1.5.1. Экзотоксины 37
1.5.2. Рибонуклеазы 38
1.5.3. Колицины 40
1.6. Заключение 45
Экспериментальная часть 46
Глава 2. Материалы и методы 46
2.1. Используемые в экспериментальной работе материалы 46
2.1.1. Биоптаты слизистой толстой и прямой кишки 46
2.1.2. Клеточные культуры 46
2.1.3. Фермент 47 2.2. Методы исследований 47
2.2.1. Среды и условия культивирования бактерий 47
2.2.2. Идентификация бактерий 47
2.2.3. Определение антагонистической активности выделенных бактерий по отношению к E. coli K12 50
2.2.4. Определение устойчивости выделенных бактерий к антибиотикам
2.2.5. Определение гемолитической активности бактерий 51
2.2.6. Определение рибонуклеазной активности 51
2.2.7. Характеристика состава парамагнитных центров клеток E. coli К12 под действием РНКазами 53
2.2.8. Оценка цитотоксичности культуральной жидкости бактерий по отношению к опухолевым клеткам кишечника HuTu 56
2.2.9. Молекулярный анализ генетических детерминант, контролирующих адгезивную, гемолитическую и токсигенную активности у E. coli 56
2.2.10. Выделение и характеристика плазмидной ДНК E. coli 58
2.2.11. Статистическая обработка результатов 59
ГЛАВА 3. Результаты исследований и их обсуждение 60
3.1. Структура бактериального сообщества эпителия прямой кишки пациентов с колоректальным раком 60
3.2. Культивируемые бактерии, выделенные из образцов биоптатов пациентов с колоректальным раком
3.3. Антагонистическая активность выделенных бактерий по отношению к E.coli K12
3.4. Гемолитическая активность изолированных бактерий 71
3.5. In vitro чувствительность выделенных бактерий к антибиотикам 71
3.6. Рибонуклеазная активность бактерий 74
3.6.1. Рибонуклеазная активность выделенных бактерий на бесфосфорной среде 74
3.6.2. Рибонуклеазная активность культуральной жидкости E. сoli 77
3.7. Генерация активных форм кислорода клетками E. coli К12 под действием РНКазы - биназы. 78
3.8. Цитотоксичность стерильной культуральной жидкости выделенных E. coli после 16 ч культивирования 79
3.9. Молекулярный анализ генетических детерминант, контролирующих адгезивную, гемолитическую и токсигенную активности у E. coli 80
3.10. Выделение и характеристика плазмидной ДНК E. coli 85
Обсуждение 89
Заключение 95
Список литературы 97
