Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 20
1.1. Общие сведения о физиологии и метаболизме человеческих эритроцитов 20
1.1.1. Клеточный объем эритроцитов 22
1.1.2. Метаболизм эритроцитов
1.1.2.1. Энергетический метаболизм 29
1.1.2.2. Антиокислительный метаболизм 33
1.1.2.3. Метаболизм аденилатов 36
1.1.3. Связь между метаболизмом и
жизнеспособностью эритроцитов 40
1.2. Методы введения препаратов в эритроциты 42
1.2.1. Осмотические методы 42
1.2.1.1. Обратимый осмотический лизис 42
1.2.1.2. Ступенчатый лизис 43
1.2.1.3 Осмотический импульс 44
1.2.1.4. Гипотонический диализ 44
1.2.1.5. Ступенчатый диализ 48
1.2.1.6. Проточный диализ 48
1.2.2. Неосмотические методы 49
1.2.2.1. Электрический пробой клеточной мембраны 49
1.2.2.2. Лазерный удар 50
1.2.2.3. Химическая модификация клеточной мембраны 50
1.2.2.4. Использование проникающих пептидов 51
1.2.2.5. Присоединение препаратов к поверхности эритроцитов 52
1.2.2.6. Равновесное связывание с эритроцитами 53
1.3. Использование эритроцитов в качестве переносчиков биологически активных препаратов 54
1.3.1. Коррекция ферментопатий 55
1.3.2. Эритроцит как биореактор 58
1.3.3. Коррекция тромболитической активности 59
1.3.4. Использование эритроцитов в целях иммунизации 60
1.3.5. Выведение избытка железа из организма 60
1.3.6. Коррекция кислород-транспортной функции 61
1.3.7. Транспорт противоопухолевых препаратов 62
1.4. Использование эритроцитов в качестве переносчиков L-аспарагиназы 64
1.4.1. Общие сведения о препарате L-аспарагиназа 64
1.4.2. Аспарагиназа в эритроцитах 65
1.5. Использование эритроцитов в качестве переносчиков антрациклиновых антибиотиков 72
1.5.1. Общие сведения об антрациклиновых антибиотиках 72
1.5.2. Макромолекулярные и корпускулярные переносчики антрациклиновых антибиотиков 75
1.5.3. Введение антрациклиновых антибиотиков
в эритроциты 78
1.5.4. Повреждающее воздействие антрациклиновых антибиотиков на эритроциты 81
1.5.5. Противоопухолевая активность эритроцитов, нагруженных антрациклиновыми антибиоотиками 83
1.5.6. Использование нагруженных антрациклиновыми антибиотиками эритроцитов в ветеринарной
и медицинской практике 85
ГЛАВА 2. Регистрация атф в интактных эритроцитах человека с помощью введенной в клетки люциферазы 91
2.1. Введение 91
2.2. Материалы и методы 91
2.3. Результаты
2.3.1. Влияние люциферина на люминесценцию эритроцитов, нагруженных люциферазой 93
2.3.2. Распределение люциферина между инкубационной средой и эритроцитами 95
2.3.3. Кинетика люциферазной реакции в эритроцитах 98
2.3.4. Кинетика транспорта люциферина через мембрану эритроцитов 98
2.3.5. Зависимость люминесценции эритроцитов, нагруженных люциферазой, от температуры 102
2.3.6. Регистрация изменений концентрации АТФ
в эритроцитах с помощью введенной в них люциферазы 102
2.4. Обсуждение результатов 105
ГЛАВА 3. Эритроциты, нагруженные L-аспарагиназой 109
3.1. Введение 109
3.2. Транспорт аспарагина через мембрану человеческих эритроцитов и его разрушение введенной в эритроциты аспарагиназой
3.2.1. Введение 109
3.2.2. Материалы и методы 110
3.2.3. Результаты 113
3.2.4. Обсуждение результатов 117
3.3. Хранение эритроцитов, нагруженных аспарагиназой 119
3.3.1. Введение 119
3.3.2. Материалы и методы 119
3.3.3. Результаты 121
3.3.4. Обсуждение результатов 124
ГЛАВА 4. Лабораторные исследования эритроцитов в качестве переносчиков антрациклиновых антибиотиков 126
4.1. Связывание антрациклиновых антибиотиков
с эритроцитами in vitro 126
4.1.1. Введение 126
4.1.2. Материалы и методы 127
4.1.3. Результаты
4.1.3.1. Связывание даунорубицина с эритроцитами 132
4.1.3.2. Связывание доксорубицина с эритроцитами 139
4.1.3.3. Связывание антрациклиновых антибиотиков с эритроцитами, обработанными глютаровым альдегидом 142
4.1.4. Обсуждение результатов 147
4.2. Повреждение эритроцитов антрациклиновыми антибиотиками in vitro 149
4.2.1. Введение 149
4.2.2. Материалы и методы 150
4.2.3. Описание устройства для измерения деформируемости эритроцитов 151
4.2.4. Результаты
4.2.4.1. Влияние даунорубицина и доксорубицина на выход гемоглобина из эритроцитов 157
4.2.4.2. Влияние даунорубицина и доксорубицина на выход калия из эритроцитов 158
4.2.4.3. Влияние даунорубицина на объем эритроцитов 158
4.2.4.4. Влияние даунорубицина и доксорубицина на деформируемость эритроцитов 159
4.2.4.5. Влияние даунорубицина и доксорубицина на концентрацию АТФ в эритроцитах 166
4.2.5. Обсуждение результатов 166
4.3. Противоопухолевая активность и токсичность эритроцитарной формы даунорубицина на мышиных моделях 169
4.3.1. Введение 169
4.3.2. Материалы и методы 171
4.3.3. Результаты 174
4.3.3.1. Противоопухолевая активность и токсичность нагруженных даунорубицином эритроцитов на мышах с асцитной опухолью Р388 174
4.3.3.2. Противоопухолевая активность и токсичность нагруженных даунорубицином эритроцитов на мышах с эритробластным лейкозом, индуцированным вирусом Раушера 174
4.3.4. Обсуждение результатов 180
ГЛАВА 5. Клинические исследования эритроцитов, нагруженных антрациклиновыми антибиотиками 182
5.1 Фармакокинетика и переносимость эритроцитарной формы даунорубицина у больных острыми лейкозами 182
5.1.1. Введение 182
5.1.2. Материалы и методы 183
5.1.3. Результаты 1 5.1.3.1. Связывание даунорубицина с эритроцитами больных острыми лейкозами 190
5.1.3.2. Влияние даунорубицина на деформируемость эритроцитов больных 193
5.1.3.3. Фармакокинетика даунорубицина в крови и плазме больных при введении стандартной и эритроцитарной форм антибиотика 193
5.1.3.4. Переносимость эритроцитарной формы даунорубицина у больных острыми лейкозами 205
5.1.4. Обсуждение результатов 209
5.2. Фармакокинетика и переносимость эритроцитарных форм доксорубицина у больных лимфопролиферативными заболеваниями 212
5.2.1. Введение 212
5.2.2. Материалы и методы 215
5.2.3. Результаты 222
5.2.3.1. Связывание доксорубицина с эритроцитами в крови больных 222
5.2.3.2. Фармакокинетика доксорубицина в крови и плазме больных при введении стандартной и эритроцитарной форм антибиотика 223
5.2.3.3. Переносимость эритроцитарной формы доксорубицина у больных лимфопролиферативными
заболеваниями 225
5.2.4. Обсуждение результатов 235
Заключение. Перспективы использования эритроцитов в качестве переносчиков биологически активных препаратов 237
Выводы 242
Список литературы
