Введение
I Обзор литературы 8
1. Структура органов дыхания 8
1.1 Строение стенки воздухоносных путей 9
1.2 Носовая полость, глотка и гортань 10
1.3 Трахея и бронхи 11
1.4 Лёгкие 13
1.5 Регенерация респираторного эпителия 14
2. Окислительный стресс и активные формы кислорода 18
2.1 Активные формы кислорода и свободные радикалы 18
2.2 Типы и источники активных форм кислорода и свободных радикалов 20
2.3 Действие АФК в норме 24
2.4 Повреждающее действие АФК 26
2.5 Роль АФК в патогенезе органов дыхания 28
2.5.1 Острый респираторный дистресс-синдром 29
2.5.2 Хроническая обструктивная болезнь лёгких 30
2.5.3 Ингаляционные травмы 31
2.5.4 Другие заболевания 32
3. Антиоксидантные системы в органах дыхания 34
3.1 Супероксиддисмутазы 36
3.2 Каталаза 37
3.3 Глутатионпероксидазы 37
3.4 Тиоредоксины 38
3.5 Пероксиредоксины
3.6 Пероксиредоксин 6 40
3.7 Химерные ферменты-антиоксиданты 42
4. Факторы, регулирующие процессы регенерации в эпителиальных тканях 43
5. Паракринное действие мезенхимальных стволовых клеток 45
Постановка задачи исследования 48
II Материалы и методы 50
1. Материалы 50
1.1 Реактивы 50
1.2 Ферменты-антиоксиданты 50
1.3 Белки культуральной жидкости мезенхимальных стволовых клеток 52
1.4 Токсичность экзогенных белков 53
1.5 Антитела 53
2 Методы 54
2.1 Термический ожог дыхательных путей крысы 54
2.2 Химический ожог дыхательных путей крысы 55
2.3 Эндотрахеальное введение препаратов 56
2.4 Изготовление парафиновых срезов 56
2.5 Гистологический анализ 57
2.6 Выявление муцин-секретирующих клеток 58
2.7 Иммуногистохимический анализ 58
2.8 Получение соскоба респираторного эпителия трахеи крысы 59
2.9 Определение цитокинов в соскобе трахеи крысы 59
2.10 Мечение пероксиредоксина 6 флуоресцентным красителем 60
2.11 Электрофорез белков 60
2.12 Иммуноблоттинг III Результаты 62
1. Сравнительный анализ моделей термического и химического ожогов дыхательных путей крысы 62
2. Проницаемость респираторного эпителия для экзогенных белков в норме и после химического ожога 72
3. Эффект ферментов-антиоксидантов и паракринных факторов МСК на регенерационные процессы в эпителии трахеи после химического ожога 74
4. Механизм регенерации эпителия после химического ожога 86
5. Интерлйкиновый профиль соскоба эпителия после химического ожога 89
6. Особенности регенерационных процессов в респираторном эпителии 92
6.1 Исследование эпителиальных включений в подслизистом слое трахеи 92
6.2 Идентификация клеток, входящих в замкнутые структуры подслизистого слоя 93
6.3 Определение предшественников включений в подслизистом слое 97
6.4 Новый механизм регенерации респираторного эпителия 98
IV Обсуждение 101
Выводы 105
Благодарности 106
Список литературы 1
