Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Кислород как участник биохимических реакций 9
1.2. Транскрипционный комплекс гипоксия-индуцибельного фактора (HIF): кислород зависимая регуляция 12
1.3. Гены-мишени HIF 19
1.4. Миметики гипоксии: кобальт, никель и хелаторы железа 22
1.5. Регуляция гипоксия-индуцибельного фактора (HIF) активными формами кислорода. 27
1.6. Кислород-независимая регуляция гипоксия-индуцибельного фактора (HIF). 30
1.7. Лактоферрин – физико-химические свойства, функции, связь с метаболизмом железа. 31
1.8. Заключение по обзору литературы: сравнение лактоферрина и дефероксамина 34
2. Материалы и методы исследования 37
2.1. Реактивы, использованные в работе 37
2.2. Хроматографические методы 37
2.2.1. Синтез сорбентов 37
2.3. Спектрофотометрия 39
2.4. Аналитические методы
2.4.1. Пара-фенилендиамин-оксидазная активность церулоплазмина 39
2.4.2. Ферроксидазная активность церулоплазмина 39
2.4.3. Измерение концентрации гемоглобина 40
2.4.4. Измерение концентрации железа в сыворотке крови 40
2.5. Электрофоретические методы 40
2.5.1. Диск-электрофорез в щелочной системе 40
2.5.2. Диск-электрофорез в кислой системе 41
2.5.3. Электрофорез в щелочной системе в присутствии SDS 41
2.5.4. Электрофорез в присутствии SDS в высокомолярной Tris-буферной системе 42
2.6. Получение белковых препаратов 42
2.6.1. Выделение церулоплазмина сыворотки крови крыс и мышей 42
2.6.2. Выделение лактоферрина грудного молока 42
2.6.3. Выделение трансферрина из сыворотки крови человека 43
2.6.4. Подготовка образцов тканей для выявления иммунореактивных белков 43
2.7. Иммунохимические методы 44
2.7.1. Подготовка антигенов для иммунизации 44 2.7.2. Иммунизация кроликов 44
2.7.3. Выделение иммуноглобулинов G сыворотки 44
2.7.4. Вестерн-блоттинг 45
2.7.5. Твердофазный иммуноферментный анализ эритропоэтина 46
2.7.6. Ракетный иммуноэлектрофорез церулоплазмина крыс 2.8. Изучение антигипоксической активности 47
2.9. Изучение антианемической активности 2.9.1. Модель постгеморрагической анемии 48
2.9.2. Модель гемолитической анемии 2.10. Содержание крыс на диете с хлоридом серебра 48
2.11. Статистическая обработка результатов 49
2.12. Получение образцов от здоровых доноров и лабораторных животных 50
3. Результаты 51
3.1. Исследование антигипоксической активности лактоферрина на модели острой гипоксии с
гиперкапнией у мышей 51
3.2. Исследование антианемической активности лактоферрина на моделях острой
постгеморрагической и гемолитической анемии у крыс 52
3.3. Исследование влияния лактоферрина на иммунореактивные гипоксия-индуцибельные
факторы 1-альфа и 2-альфа, эритропоэтин и церулоплазмин в образцах тканей мышей и крыс 58
3.4. Исследование влияния выключения ферроксидазной активности церулоплазмина у крыс,
получавших диету с AgCl, на защитные свойства лактоферрина 61
3.5. Исследование влияния введения апо-лактоферрина беременным и лактирующим крысам на стабильность гипоксия-индуцибельных факторов у их потомства 69
4. Обсуждение результатов 71
5. Выводы 79
6. Список сокращений 80
7. Список литературы 84
