Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
Глава 1.1 Внутриклеточная локализация интегральных мембранных белков 11
Глава 1.2 Топология мембранных белков 16
Глава 1.3 Топогенные сигналы и правила топологии 20
Глава 1.4 Правило положительных зарядов внутри 22
Глава 1.5 Роль липидов в топогенезе 25
Глава 1.6 Липид-зависимое формирование третичной структуры мембранных белков 28
Глава 1.7 Участие липидов в определении топологии мембранных белков 32
Глава 1.8 Изменение ориентации трансмембранных доменов после сборки 34
Глава 1.9 Свойства липидов, влияющих на топологию и функцию мембранных белков 39
Глава 1.10 Гипотеза баланса зарядов 41
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований 46
Глава 2.1 Оборудование и реагенты 46
Объекты исследования 48
Глава 2.2 Использованные микроорганизмы и плазмиды 48
Методы, использованные в работе 50
Глава 2.3 Культивирование микроорганизмов 50
Глава 2.4 Мечение фосфолипидов и экстракция 51
Глава 2.5 Одномерная тонкослойная хроматография фосфолипидов 51
Глава 2.6 Двумерная тонкослойная хроматография фосфолипидов 52
Глава 2.7 Выделение и солюбилизация внутренних и внешних мембран E.coli 52
Глава 2.8 Выделение и солюбилизация внутренних мембран E.coli в инвертированной ориентации 52
Глава 2.9 Определение КДО в мембранах 53
Глава 2.10 Денатурирующий электрофорез мембранных белков в ПААГ и Вестерн-блоттинг 54
Глава 2.11 Истерн-Вестерн блоттинг 55
Глава 2.12 Определение топологии мембранных белков методом анализа доступности замещенных цистеинов 55
Глава 2.13 Определение скорости транспорта субстрата транспортера лактозы через внутреннюю мембрану 57
Глава 2.14 Трансформация клеток E.coli плазмидами 58
Глава 2.15 Статистическая обработка данных и вычисления 58
ГЛАВА 3. Результаты и их обсуждение 59
Глава 3.1 Влияние лизофосфатидной кислоты на формирование третичной структуры и встраивание в мембрану транспортера лактозы 59
Глава 3.2 Влияние лизилфосфатидилглицерина на топологию транспортера лактозы 68
Глава 3.3 Внутримолекулярное взаимодействие транспортера лактозы LacY при встраивании в мембрану 72
Глава 3.4 Распределение фосфолипидов в бислое мембраны Escherichia coli 77
Глава 3.5 Анализ распределения заряженных аминокислот гомологов транспортера лактозы бактерий
с различным липидным составом мембраны 80
Заключение 89
Список использованных источников
