Введение
Глава 1. Обзор литературы
1. Алеутская болезнь норок.
1.1. Общие сведения об инфекции.
1.2. Хроническая форма алеутской болезни норок.
1.2.1. Симптомы и патологоанатомические изменения.
1.2.2. Тканевой тропизм и особенности вирусной репродукции.
1.2.3. Плазмоцитоз и гипергаммаглобулинемия.
1.2.4. Патогенез гломерулонефрита, вызванного инфекцией вируса алеутской болезни норок.
1.2.5. Роль антител в патогенезе алеутской болезни норок.
1.2.6. Возможная роль позднего промотора автономных парвовирусов в определении характера течения заболевания.
1.3. Острая пневмония у новорожденных щенят норок (легочная форма алеутской болезни норок) .
1.3.1. Симптомы и патологоанатомические изменения.
1.3.2. Патогенез легочной формы заболевания.
1.4. Современное состояние диагностики и профилактики алеутской болезни норок.
2. Молекулярно-биологическая характеристика вируса алеутской болезни норок.
2.1. Структура и стратегия репликации вирусного генома.
2.2. Структура и функции вирусных белков.
2.3. Структура и свойства вирионов вируса алеутской болезни норок.
3. Комплементарно адресованные полинуклеотиды как антивирусные агенты .
3.1. Антисмысловые олигодезоксинуклеотиды.
3.2. Антисмысловые РНК.
3.3. Рибозимы.
Глава 2. Материалы и методы.
1. Материалы.
1.1. Клеточные линии, вирусы и бактериальные штаммы.
1.2. Плазмидные векторы.
1.3. Ферменты и другие реактивы.
2. Методы.
2.1. Основные генноинженерные методы.
2.2. Приготовление компетентных клеток Е. coli и их трансформация плазмидной ДНК
2.3. Электрофорез молекул ДНК в агарозном геле.
2.4. Полимеразная цепная реакция.
2.5. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
2.6. Дот- и блот-гибридизационный анализ ДНК и РНК.
2.7. Реакция транскрипции.
2.8. Реакция расщепления РНК-субстрата рибозимом.
2.9. Культивирование клеточных линий и вируса.
2.10. Нейтрализация инфекционной активности вируса.
2.11. Электронная микроскопия.
2.12. Трансфекция клеточных линий методом кальций-фосфатной преципитации .
2.13. Выявление временной экспрессии гена -галактозидазы в клеточных линиях.
2.14. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей.
Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение.
1. Конструирование рекомбинантных плазмид для изучения противовирусного действия антисмысловых РНК и рибозимов.
1.1. Создание плазмидных конструкций с генами антисмысловых и смысловых РНК.
1.2. Создание плазмидных конструкций для изучения каталитической активности рибозимов.
2. Изучение принципиальной способности созданных рибозимов расщеплять РНК-мишень in vitro.
3. Оптимизация условий культивирования вируса алеутской болезни норок в клеточных линиях CRFK и FS.
4. Идентификация вируса, продуцируемого культурой клеток FS.
5. Разработка методики для оценки уровня вирусной репродукции в клетках с использованием метода дот-гибридизации ДНК.
6. Изучение противовирусной активности антисмысловых РНК в культуре клеток FS.
Выводы
Благодарности
Список литературы
Список сокращений.
