Введение
Обзор литературы 7
1. Структура хроматина и транскрипция. 7
1.1. Регуляция транскрипции на разных уровнях организации хроматин . 7
1.2. Общая характеристика доменов генома, 9
1.3. Глобиновый генный кластер кур 12
1.4. Отличительные черты и функции гетерохроматина. 18
2. Факторы, определяющие компактизацию хроматина, 19
2.1, Линкерные гистоны, 19
2.2, Гистоновый код, 21
2.3, Негистоновые белки хроматина позвоночных, 24
3. Генетические элементы на границах активного и неактивного хромагина, 28
3.1. Инсуляторы, как антагонисты энхансеров. 28
3.2. Инсуляторы, как барьерные элементы, 33
Материалы и методы исследования. 35
1. Реактивы 35
2. Коммерческие наборы 36
3. Антитела 36
4. Приборы и оборудование: 37
5. Составы основных растворов 37
6. Линии клеток 39
7. Выделение ядер клеток 39
8. Генно-инженерные методы. 41
8.1. Полимеразная цепная реакция (ТЩР) 41
8.2. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции и дефосфорилирование 41
9. Электрофоретические методы. 41
9.1. Электрофорез белков в ПААГ 41
9.2, Электрофорез ДНК в агарозном геле, 42
10. Western-гибридизация. 42
11Формальдегидная фиксация и иммунопреципитация хроматина. 44
Результаты и обсуждение 51
1. Оценка количества белка MENT и белков НР1. клетках крови на конечных стадиях дифференцировки. 51
2, Оценка уровня метилирования гистона НЗ в клетках крови на конечных стадиях дифференцировк . 54
3. Фиксация и иммунопреципитаиия хроматина клеток крови Gallus gallus. 56
3.1. Подбор условий для фиксации и иммунопреципитании хроматина при помощи белка MENT 56
3.2, Подбор последовательностей ДНК для зондов, использованных в гибридизации, 60
3.3, Распределение белка MENT вдоль 3-глобинового домена G.gallus. 64
3.3.1, Распределение белка MENT вдоль ft-глобинового домена в эритроцитах G, gallus, 66
3.3.2. Распределение белка MENT вдоль р-глобигювого домена в лимфоцитах G.gallus. 69
4, Сравнение картины распределения белка MENT с картиной ацетилирования и метилирования гистонов вдоль р-глобинового домена генома Gallus gallus . 73
5, Влияние экспрессии белка MENT в культуре клеток NIH3T3 на уровень ацетилирования и метилирования гистонов.
Выводы 79
Список использованной литературы 80
Приложение 95
