Введение
II. ОБЗОР ЛИТЕРАРУРЫ
ГЛАВА I. Характеристика генома и биологические особенности ретровирусов 4 -30
а) Структура генома ретровирусов 4-5
б) Обратная транскрипция и образование кДНК. 5 3 7
в) Интеграция кДНК 7 - 10
г) Структура и функции ин .10 -16
д) Усиливающие транскрипцию последовательности в ти ретровирусов 16 -20
е) Структурные участки генома, необходимые для самосборки и репликации. 20 -22
ж) Биологические свойства ретровирусов 22-28
з) Регуляция экспрессии ретровирусов общекле точными механизмами 28 -30
и) Общие черты ретровирусов и мобильных генетических элементов 30-32
ГЛАВА II. Векторные молекулы, полученные на основе геномов ретро вирусов . 33-38
ГЛАВА III. Использование других моделей для получения векторов эукариот 39-40
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. , .41-49
1) Используемые вирусы и ферменты. 41
2) Выделение высокомолекулярной ДНК из клеток C-I 41-42
3) Получение 35 s РНК из препаратов 42
4) Получение и очистка кДНК RLV 43
5) Амплификация фагов 43-44
6) Конструирование библиотеки генов 44
7) Скрининг библиотеки генов 44
8) Реклонирование в плазмидные векторы. 45
9) Анализ ДНК методом электрофореза в геле и блоттинг-гибридизации по Саузерну 45-46
10) Выделение ЕсоЖ рестриктазы. . . 46
11) Ник-трансляция. . 46-47
12) Выделение плазмидной ДНК 47
13) Элюция ДНК из агарозного геля 47
14) Выделение ДНК из фагов по Блатнеру.. 47
15) иДот"-гибридизация фаговых клонов 47-48
16) Радиоиммунопреципитационный анализ белков 48
17) Определение нуклеотидной последовательности ДНК. ..48-49
РЕЗУЛЬТАТЫ 50 - 97
I) Получение на фаге Харон 4А библиотеки генов эритролейкозных клеток мышей линии AKR, за ражённых ELV 50 - 54
2) Скрининг библиотеки. 54-56
3) Рестрикционный анализ полученных клонов. 56 - 62
4) Анализ плазмидных клонов, содержащих про-вирусные последовательности . 62-70
5) Получение вектора-экспресси эукариот на
основе провируса из плазмиды 147.2 70 -74
6) Характеристика нровируса экзогенного происхождения на основ из генома клеток C-I 75-83
7) Создание вектора экспрессии на основе провируса из клона 107 .84-93
8) Определение нуклеотидной последовательности ДНК из клона 107.4 93-97
V ОБСУЖДЕНИЕ 98-112
1) Характеристика клонов, содержащих провирусн MuLV 98-103
2) Вектор экспрессии эукариот на основе эндогенного провируса из клона 147. 103 - 104
3) Характеристика провируса экзогенного происхождения 104 - 106
4) Прошторные функции LTR провируса из клона 107 106 - 107
5) Вектор экспрессии на основе провируса из клона 107
6) Нуклеотидная последовательность фрагмента ДНК из 3* части генома провируса клона 107.4 111 -112
VI. ВЫВОДЫ 113 - 114
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТИШ 115 - 135
