Введение....................................................................................................................... 5
Глава 1 Литературный обзор ................................................................................. 12
1.1 Физиология тромбоцита............................................................................... 12
1.2 Современная модель ответа системы гемостаза на повреждения сосуда14
1.3 Форма тромбоцита ........................................................................................ 15
1.3.1 Форма нативного тромбоцита ............................................................. 16
1.3.2 Связь повышения концентрации Са2+ в цитозоле и изменения формы
тромбоцита........................................................................................................... 17
1.3.3 Форма активированного тромбоцита.................................................. 18
1.4 Физические факторы, приводящие к активации тромбоцитов ................ 19
1.4.1 Состояние тромбоцитов при разных температурах .......................... 19
1.4.2 Состояние тромбоцитов при различной сдвиговой скорости.......... 21
1.5 Химические факторы, приводящие к активации тромбоцитов................ 22
1.5.1 Реакция тромбоцитов на тромбин....................................................... 22
1.5.2 Реакция тромбоцитов на АДФ............................................................. 23
1.5.3 Реакция тромбоцитов на коллаген ...................................................... 24
1.5.4 Реакция тромбоцитов на адреналин (эпинефрин)............................. 24
1.6 Антитромбоцитарная терапия ..................................................................... 25
1.6.1 Ингибитор COX .................................................................................... 25
1.6.2 Блокаторы рецепторов к АДФ............................................................. 26
1.6.3 Блокаторы рецепторов к тромбину..................................................... 27
1.6.4 Блокаторы гликопротеина IIb/IIIa ....................................................... 28
1.6.5 Ингибиторы фосфодиэстеразы............................................................ 28
1.7 Методы исследования тромбоцитов ........................................................... 29
1.7.1 Микроскопия ......................................................................................... 29
1.7.2 Метод Култера....................................................................................... 30
3
1.7.3 Оптическая агрегометрия..................................................................... 31
1.7.4 Проточная цитометрия ......................................................................... 32
1.8 Метод расчёта сигнала светорассеяния от частиц произвольной формы34
1.9 Метод решения обратной задачи светорассеяния ..................................... 36
1.9.1 Оценка погрешностей определения параметров ζ ............................ 38
1.10 Обсуждение результатов главы 1................................................................ 39
Глава 2 Измерение формы тромбоцитов, с использованием технологии
сканирующей проточной цитометрии .................................................................... 40
2.1 Технология сканирующей проточной цитометрии ................................... 40
2.2 Оценка сдвиговой скорости внутри гидродинамической системы
сканирующего проточного цитометра .................................................................... 42
2.3 Модернизация системы подачи пробы сканирующего проточного
цитометра ................................................................................................................... 44
2.4 Подготовка пробы......................................................................................... 47
2.4.1 Стандартный протокол забора крови для работы с тромбоцитами. 47
2.4.2 «Мягкий» протокол подготовки пробы тромбоцитов....................... 48
2.5 Обсуждение результатов главы 2................................................................ 49
Глава 3 Влияние выбора оптической модели на значение параметра формы
тромбоцита................................................................................................................. 51
3.1 Упрощённая оптическая модель нативного тромбоцита.......................... 51
3.2 Влияние искривления периферического кольца микротрубочек на решение
обратной задачи светорассеяния ............................................................................. 52
3.3 Влияние появления псевдоподий на решение обратной задачи
светорассеяния........................................................................................................... 56
3.4 Обсуждение результатов главы 3................................................................ 60
Глава 4 Функция распределения тромбоцитов по индексу формы................... 61
4.1 Распределения – кандидаты для описания распределения тромбоцитов по
индексу формы .......................................................................................................... 62
4
4.1.1 Сумма плотностей вероятности Гаусс распределений ..................... 62
4.1.2 Сумма плотностей вероятности гамма распределений .................... 63
4.1.3 Сумма плотностей вероятности бета распределений ....................... 65
4.2 Выбор подходящей суммарной функции ................................................... 67
4.3 Обсуждение результатов главы 4................................................................ 70
Глава 5 Феноменологическая модель активации тромбоцитов......................... 72
5.1 Математическое описание популяции тромбоцитов до воздействия
стимулов..................................................................................................................... 72
5.2 Зависимость изменения индекса формы тромбоцита под влиянием
определённой концентрации АДФ.......................................................................... 75
5.3 Выбор подходящей зависимости изменения индекса формы тромбоцита
под влиянием определённой концентрации АДФ ................................................. 77
5.4 Обсуждение результатов главы 5................................................................ 83
Глава 6 Экспериментальные исследования популяции тромбоцитов .............. 84
6.1 Измерение тромбоцитов на двух длинах волн одновременно ................. 84
6.1.1 Выбор тромбоцитов, соответствующих оптической модели
«сплюснутый сфероид» ...................................................................................... 85
6.2 Определение фракционного состава нативных тромбоцитов для условно
здоровых доноров...................................................................................................... 89
6.3 Определение чувствительности популяции тромбоцитов к агонисту
активации для условно здоровых доноров ............................................................. 94
6.4 Влияние антитромбоцитарной терапии на чувствительность популяции
тромбоцитов к агонисту активации......................................................................... 99
6.5 Обсуждение результатов главы 6.............................................................. 102
Заключение .............................................................................................................. 104
Список сокращений и условных обозначений..................................................... 107
Список литературы ................................................................................................. 110
