Введение
Глава I. Литературный обзор 9
1.1. Комплементарно адресованная модификация, перспективы биологических приложений подхода 9
1.2. Конструкции и основные свойства реагентов для комплементарно адресованной модификации нуклеиновых кислот ю
1.2.1. Реакционноспособные терминальные производные олиго- и полинуклеотидов 11
1.2.2. Полимодифицирующие реагенты 18
1.3. Комплементарно адресованное алкилирование 2 ,3 -0-[4-(и-2-хлорэтил-и-метиламино)бензилиден]олигонуклеотидами 30
1.3.1. Комплементация 2,з-0-[4-(ш-2-хлорэтил-н-метиламино)бензилиден]олигонуклеотидов ... 31
1.3.2. Механизмы алкилирования в комплементарных комплексах ........ 34
1.4. Влияние олигонуклеотидов на биохимические и биологические процессы в культурах живых клеток 37
Глава 2. Результаты и обсуждение результатов . . 48
2.1. Обоснование методов анализа и фракционирования биополимеров клеток асцитной карциномы Кребс-2 49
2.2. Сорбция бензилиденовых производных олиго-нуклеотидов клетками асцитной карциномы Кребс-2 61
2.3. Алкилирование биополимеров в клетках асцитной карциномы Кребс-2 г С]-производными нонатимидилилуридина 69
2.4. Анализ специфичности внутриклеточного ал-килирования нуклеиновых кислот 73
2.5. Химическая направленность внутриклеточного алкилирования нуклеиновых кислот
2.6. Сохранность адреса реагентов, ковалентно связанных комплементарными нуклеиновыми кислотами в клетках асцитной карциномы Кребс-2 81
2.7. Кинетика и механизм внутриклеточного алкилирования 84
2.8. Жизнеспособность клеток асцитной карциномы Кребс-2, экспонированных с реагентами .91
Глава 3. Экспериментальная часть 95
3.1. Вспомогательные материалы и методики ... .95
3.2. Реагенты и их оксианалоги .97
3.3. Культура клеток 99
3.4. Выделение ядер
3.5. Исследования сорбции реагентов и их окси-аналогов Ю1
3.6. Исследование алкилирования биополимеров в клетках 102
3.7. Выделение суммарной РНК клеток 104
3.8. Выделение ДНК клеток 105
3.9. Выделение poly(А)-трактов мРНК 107
ЗЛО. Микроколоночная гель-хроматография poly (А)+- мРНК 108
3.11. Идентификация алкилированных в клетках оснований нуклеиновых кислот 108
3.12. Определение цитотоксичности реагентов и их оксианалогов Ю9
Выводы 113
Цитированная литература 115
