Введение
Глава I. Оперон биосинтеза рибофлавина Bacillus subtilis 7
І. І Свойства рибофлавина и его роль в метаболизме организмов 8
1.2. Биосинтез рибофлавина у бактерий 11
1.3. Структура, организация и регуляция рибо флавинового оперона Bacillus subtilis . 15
I. 4 Клонирование рибофлавинового оперона Bacillus subtilis в составе рекомбинантных плазмид. 21
Глава II. Клонирование ДНК в клетках Bacillus subtilis . 23
II. 1 Векторы для клонирования ДНК в клетках Bacillus subtilis 25
II. 2. Стабильность плазмид. 31
II.2.1. Структурная нестабильность. 31
II.2.2. Сегрегационная нестабильность. 32
Экспериментальная часть.
Глава III. Материалы и методы. 35
Глава IV. Конструирование гибридных плазмид . 41
IV. 1. Минимизация фрагмента хромосомы Bacillus subtilis, содержащего в своем составе оперон биосинтеза рибофлавина . 42
IV.2.Создание нового поколения векторов для клонирования в клетках Bacillus subtilis. 50
IV.2.1.Конструирование векторов на основе низкокопийной плазмиды рМХЗО. 51
IV.2.2.Конструирование векторов на основе высококопийной плазмиды рСВ20. 54
IV. 3. Клонирование "оптимизированного" оперона биосинтеза рибофлавина в составе векторов pAR13, pAR21, рСВ20 и рАШ . 57
Глава V. Исследование свойств полученных плазмид в клетках модельного штамма Bacillus subtilis 66
V. l. Определение уровня биосинтеза рибофлавина 66
V.2. Определение уровня стабильности плазмид 67
Обсуждение результатов 70
Выводы 88
