Введение
Глава I. Обзор литературы 16
1.1. Иммунобиология развития опухоли 16
1.1.1. Механизмы ускользания опухоли из-под иммунного надзора 16
1.1.2. Противоопухолевый иммунный ответ и адоптивная иммунотерапия 18
1.2. Характеристики и рецепторы NK-клеток 21
1.2.1. Лектиноподобный активирующий рецептор NKG2D и его лиганды 33
1.3. Обучение NK-клеток 35
1.4. Функции и роль NK-клеток в организме 36
1.5. Регуляция функциональной активности NK-клеток 42
1.6. Взаимодействие NK-клеток c клетками микроокружения опухоли и иммуносупрессия 44
1.7. Применение NK-клеток в терапии 48
1.8. Аллогенные NK-клетки для адоптивной иммунотерапии 54
1.9. Методы получения активированных NK-клеток in vitro 59
1.10. Оценка активационных способностей цитотоксических лимфоцитов 63
Глава II. Материал и методы 69
2.1. Характеристика клинического материала 69
2.1.1. Характеристика пациентов по изучению иммунологических показателей крови 70
2.1.2. Характеристика пациентов, получивших адоптивную иммуннотерапию 73
2.1.3. Критерии отбора пациентов в исследование 78
2.1.4. Оценка общего состояния онкологического больного 81
2.2. Методы исследования 82
2.2.1. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови 82
2.2.2. Фенотипирование мононуклеаров периферической крови 83
2.2.3. Проточная цитофлуориметрия 84
2.2.4. Методы культивирования клеток 85
2.2.5. Флуоресцентная микроскопия 89
2.2.6. Иммуноферментный анализ 90
2.2.7. Определение показателей информативности выявления sMICA методом ИФА 94
2.2.8. Оценка жизнеспособности и пролиферативной активности лимфоцитов 95
2.2.9. Оценка цитотоксической активности лимфоцитов 96
2.2.10. Выделение NK-клеток методом магнитной сепарации 98
2.2.11. Получение, очистка и определение физико-химических свойств рекомбинантного белка MICA 99
2.2.12. Иммуноблот-анализ 102
2.2.13. Методика адоптивной иммунотерапии 103
2.3. Статистический анализ данных 104
Глава III. Результаты оценки дисбаланса показателей иммунитета у онкологических больных 106
3.1. Выявление растворимых форм молекул MICA в периферической крови онкологических больных 106
3.2. Информативность выявления молекул sMICA 108
3.3. Определение молекул MICA у больных КРР и меланомой 110
3.4. Выявление дисбаланса лимфоцитов у больных меланомой 114
3.5. Выявление дисбаланса лимфоцитов у больных КРР 117
3.6. Взаимосвязь между экспрессией NKG2D и уровнем sMICA 121
3.7. Оценка уровня цитокинов в сыворотке крови онкологических больных 126
3.8. Получение рекомбинантного белка человека MICA 129
3.9. Блокирование рецептора NKG2D на NK-клетках 133
Глава IV. Разработка метода длительного культивирования и активации лимфоцитов для адоптивной иммунотерапии 139
4.1. Культивирование лимфоцитов in vitro в присутствии IL-2 139
4.2. Культивирование лимфоцитов in vitro с IL-2 и IL-15 155
Глава V. Результаты клинической апробации метода адоптивной иммунотерапии 164
5.1. Апробация метода АИТ 164
5.2. Результаты проведения АИТ у больных колоректальным раком 174
5.3. Результаты проведения АИТ у больных меланомой 179
Глава VI. Мониторинг показателей иммунитета у онкологических больных на этапах адоптивной иммунотерапии 198
6.1. Изменение фенотипа лимфоцитов у больных после первого курса АИТ 198
6.2. Мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов у больных с ОЖКТ на этапах АИТ 202
6.3. Мониторинг субпопуляционного состава лимфоцитов у больных меланомой на этапах АИТ 208
6.4. Оценка влияния АИТ на уровень цитокинов у больных 213
6.5. Изменение концентрации молекул MICA у больных после АИТ 214
Обсуждение результатов 221
Заключение 249
Выводы 256
Практические рекомендации 257
Список цитируемой литературы 259
Перечень сокращений 295
