Введение
Глава 1. Обзор литературы 18
1.1. Окислительная модификация белков – современный маркер окислительного стресса 18
1.2. Роль оксида азота и его производных в свободнорадикальных процессах; регуляция пула оксида азота 25
1.3. Факторы и механизмы управления активностью лизосомальных цистеиновых протеиназ 37
1.4. Современные представления о внелизосомальных эффектах цистеиновых катепсинов и управлении проницаемостью лизосомальной мембраны 49
Глава 2. Материалы и методы исследования 59
2.1. Объект наблюдений 59
2.2. Экспериментальные модели 59
2.2.1. Экспериментальные модели in vivo 59
2.2.2. Экспериментальные модели in vitro 62
2.3. Получение материала для исследования 64
2.3.1. Гомогенаты тканей 64
2.3.2. Субклеточное фракционирование и получение суспензий лизосом 65
2.3.3. Выделение фракций лейкоцитов, получение гомогенатов и суспензии клеток различных фракций 66
2.3.4. Получение суспензии тимоцитов и спленоцитов 68
2.4. Методы исследования 69
2.4.1. Определение концентрации белка 69
2.4.2. Определение содержания метаболитов оксида азота 69
2.4.3. Определение концентрации гомоцистеина 70
2.4.4. Оценка состояния окислительной модификации белков 70
2.4.5. Определение активности лизосомальных цистеиновых протеиназ 73
2.4.6. Метод определения аутокаталитического действия катепсинов 74
2.4.7. Оценка лабильности лизосомальной мембраны и компартментализации лизосомальных цистеиновых протеиназ 75
2.5. Статистическая обработка 76
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 77
3.1. Разработка способа комплексной оценки содержания продуктов окислительной модификации белков в тканях и биологических жидкостях 77
3.2. Изменения общей активности лизосомальных цистеиновых протеиназ в экспериментальных моделях, ассоциированных с окислительным стрессом 82
3.2.1. Изменение активности лизосомальных цистеиновых протеинах лейкоцитов при in vitro- моделированном окислительном стрессе 82
3.2.2. Окислительная модификация белков и активность катепсинов В, L, H в динамике экспериментального венозного тромбоза 84
3.2.3. Окислительная модификация белков и активность катепсинов B, L, H тимоцитов и спленоцитов при in vitro-воздействии модуляторов синтеза оксида азота 89
3.3. Состояние окислительной модификации белков и изменения активности и компартментализации лизосомальных цистеиновых протеиназ при экспериментальном изменении синтеза оксида азота in vivo 102
3.3.1. Характеристика экспериментальных моделей 102
3.3.2. Результаты комплексной оценки состояния окислительной модификации белков ткани печени, почки и легкого под действием модуляторов синтеза оксида азота 105
3.3.3. Изменения активности и компартментализации катепсинов В, L, Н ткани печени, почки и легкого под действием модуляторов синтеза оксида азота 120
3.3.4. Анализ зависимости показателей активности и компартментализации катепсинов В, L, Н ткани печени, почки, легкого от состояния окислительной модификации белков при in vivo-воздействии модуляторов синтеза оксида азота 143
3.4. Оценка корректирующего влияния L-аргинина на состояние окислительной модификации белков и изменения активности и компартментализации лизосомальных цистеиновых протеиназ при экспериментальной гипергомоцистеинемии 148
3.4.1. Характеристика экспериментальных моделей 149
3.4.2. Результаты комплексной оценки состояния окислительной модификации белков ткани печени, почки, легкого и миокарда при экспериментальной гипергомоцистеинемии изолированно и в сочетании с введением L-аргинина 149
3.4.3. Изменения активности и компартментализации катепсинов В, L, Н ткани печени, почки, легкого и миокарда при экспериментальной гипергомоцистеинемии изолированно и в сочетании с введением L-аргинина 162
3.4.4. Анализ зависимости показателей активности и компартментализации лизосомальных цистеиновых протеиназ от выраженности окислительной модификации белков при экспериментальной гипергомоцистеинемии изолированно и в сочетании с введением L-аргинина 180
3.5. Состояние окислительной модификации белков и изменения активности и компартментализации лизосомальных цистеиновых протеиназ изолированных лизосом при индукции окислительного стресса in vitro 190
3.5.1. Изменения показателей окислительной модификации белков лизосом печени крыс при in vitro-индуцированном окислительном стрессе и применении модуляторов генерации оксида азота 191
3.5.2. Влияние in vitro- индуцированного окислительного стресса и модуляторов генерации оксида азота на активность лизосомальных цистеиновых протеиназ и проницаемость лизосомальной мембраны 201
3.5.3. Зависимость активности катепсинов В, L, Н и показателей проницаемости лизосомальной мембраны от выраженности окислительного повреждения белков при in vitro-индуцированном окислительном стрессе и применении модуляторов генерации оксида азота 212
3.6. Возможности оценки селективного изменения компартментализации активности лизосомальных цистеиновых протеиназ 216
Заключение 222
Выводы 231
Практические рекомендации 234
Список сокращений и условных обозначений 235
Список литературы 236
