Введение
1. Литературный обзор 9
1.1. Характеристика гиперчувствительности I типа 9
1.1.1. Классификация аллергических реакций 9
1.1.2. Классификация аллергенов 9
1.1.3. Механизмы гиперчувствительности I типа 12
1.2. Иммунологическая стадия аллергии 17
1.2.1. Переключение изотипов антител. Общие механизмы 17
1.2.2. Особенности переключения изотипа антител на IgE 21
1.2.3. STAT6 как основной фактор переключения на IgE из факторов сигналинга ИЛ-4 23
1.2.4. Существование IgE+ B-лимфоцитов в герминальном центре 25
1.2.5. Роль Bcl-6 в переключении В-лимфоцитов на синтез IgE 28
1.3. Роль тканевых цитокинов и ЛКВИ II-го типа при аллергическом ответе 29
1.3.1. Понятие о тканевых цитокинах и аларминах 29
1.3.2. Роль ИЛ-25 30
1.3.3. Роль ИЛ-33 30
1.3.4. Роль ТСЛП 31
1.3.5. Лимфоидные клетки врождённого иммунитета 2-го типа 32
1.4. Заключение обзора литературы 35
2. Материалы и методы 36
2.1. Материалы 36
2.1.1. Реактивы общего назначения 36
2.1.2. Реактивы для молекулярно – биологических методов и стимулы 36
2.1.3. Антитела 37
2.1.4. Оборудование 38
2.2. Методы 39
2.2.1. Наработка рекомбинантных белков в клетках E. coli и их модификация 39
2.2.2. Работа с лабораторными животными 41
2.2.3. Определение количества антител и концентрации цитокинов в биологических образцах 44
2.2.4. Определение уровня экспрессии генов цитокинов в биологических образцах 46
2.2.5. Определение содержания субпопуляций иммунных клеток в биологических образцах 50
2.2.6. Статистическая обработка данных 53
3. Характеристика аллергического ответа у больных с аллергией на клещей домашней пыли 55
3.1.1. Наработка белков и выделение из телец включений 55
3.1.2. Определение специфического IgE в сыворотках больных с аллергией и доноров 58
3.2. Разработка модели аллергии на мышах 62
3.2.1. Зависимость гуморального ответа от дозы аллергена 62
3.2.2. Зависимость IgE ответа от способа иммунизации 66
3.2.3. Анализ продукции IgG3 антител к аллергенам 71
3.2.4. Конкуренция между рекомбинантными аллергенами в процессе формирования IgE ответа 74
3.2.5. Качественная оценка локальной анафилактической реакции 75
3.3. Роль аларминов в формировании IgE–продуцирующих B-клеток 78
3.3.1. Индукция тканевых цитокинов различными стимулами 81
3.3.2. Влияние аларминов на гуморальный ответ 84
3.4. Роль адаптивного иммунного ответа в формировании IgE– продуцирующих B-клеток 90
3.4.1. Продукция специфических IgG 90
3.4.2. Гуморальный ответ у мышей генотипа nude 93
3.4.3. Влияние предсуществующих герминальных центров на продукцию специфического IgE 97
3.4.4. Роль экстрафолликулярных В-клеточных субпопуляций лимфатического узла 99
3.4.5. Роль Т-клеток лимфатического узла в продукции специфического IgE 103
3.5. Роль различных В-клеточных субпопуляций жировой ткани при формировании IgE – ответа 106
3.5.1. Активация В-лимфоцитов в жировой ткани 106
3.5.2. Выявление IgE-продуцирующих клеток методом проточной цитометрии 110
3.5.3. IgE+ клетки жировой ткани и лимфатических узлов 113
3.5.4. Транскрипты переключения изотипов в жировой ткани и региональных лимфатических узлах 115
4. Обсуждение 120
4.1. Аллерген-специфический гуморальный ответ у больных с аллергией на клещей домашней пыли 120
4.2. Специфический гуморальный ответ в низкодозовой мышиной аллергической модели 123
4.3. Роль аларминов в формировании IgE-продуцирующих В-лимфоцитов 130
4.4. Роль адаптивного иммунного ответа и различных субпопуляций В-лимфоцитов в формировании продукции IgE 135
Заключение 149
4. Выводы 156
Благодарности 158
Список используемой литературы 159
