ВВЕДЕНИЕ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
1.1 Современные данные о диффузной В-крупноклеточной лимфоме. . . . . . . 16
1.1.1 Краткие сведения об эпидемиологической, морфологической и
клинической характеристике диффузной В-крупноклеточной лимфомы. . . . . 16
1.1.2 Современные подходы к диагностике диффузной В-крупноклеточной
лимфомы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
1.1.3 Молекулярные подтипы диффузной В-крупноклеточной лимфомы. . . . 20
1.1.4 Подходы к терапии диффузной В-крупноклеточной лимфомы. . . . . . . . 23
1.1.5 Факторы прогноза диффузной В-крупноклеточной лимфомы. . . . . . . . . 27
1.2 Значение р53-чувствительных микроРНК. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
1.2.1 Краткие сведения о гене ТР53 и белке р53. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
1.2.2 Характеристика мутаций в гене ТР53. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
1.2.3 Номенклатура и биогенез микроРНК. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
1.2.4 МикроРНК и онкогенез. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
1.2.5 Механизмы дерегуляции уровня микроРНК. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38
1.2.6. Механизмы регуляции экспрессии микроРНК белком р53. . . . . . . . . . . . 41
1.2.7 МикроРНК как потенциальные терапевтические мишени при опухолях 44
1.3 Метилирование р53-чувствительных микроРНК и онкогенез. . . . . . . . . . . 46
1.3.1 Метилирование генов микроРНК семейства mir-34 при опухолях. . . . . 46
1.3.2 Метилирование гена MIR-203 и онкогенез . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51
1.3.3 Метилирование микроРНК семейства mir-129 при опухолях. . . . . . . . . . 54
Резюме. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
2.1 Общая характеристика группы обследованных больных. . . . . . . . . . . . . . . 61
2.2 Методы клинического, лабораторного и инструментального
обследования. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 67
2.3 Специальные методы исследования. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70
3
2.3.1 Подготовка образцов ДНК для исследования. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 70
2.3.2 Бисульфитная конверсия образцов ДНК. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
2.3.3 Оценка статуса метилирования генов семейства MIR-34. . . . . . . . . . . . . . 72
2.3.4 Оценка статуса метилирования генов MIR-203 и MIR-129-2. . . . . . . . . . . 75
2.3.5 Оценка полноты бисульфитной конверсии. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 77
2.3.6 Оценка аберраций в гене ТР53. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
2.3.7 Статистическая обработка материала. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 80
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
3.1 Частота метилирования генов микроРНК mir-34а miR-34b/c, miR-129 и
miR-203 в опухолевой ткани больных диффузной В-крупноклеточной
лимфомой. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 82
3.2 Клиническое значение метилирования изучаемых генов микроРНК при
диффузной В-крупноклеточной лимфоме. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84
3.2.1 Ассоциация метилирования генов семейства микроРНК mir-34 с
особенностями клинического течения заболевания у больных диффузной
В-крупноклеточной лимфомой. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84
3.2.2 Анализ ассоциации метилирования генов MIR-203 и MIR-129-2 с
особенностями клинического течения заболевания у больных диффузной
В-крупноклеточной лимфомой. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 86
3.3 Ассоциация метилирования генов микроРНК mir-34а, miR-34b/c,
miR-129 и miR-203 с данными лабораторно-инструментального
обследования больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой. . . . . . . . . 87
3.3.1 Ассоциация метилирования изучаемых генов микроРНК
c иммуногистохимическими характеристиками диффузной
В-крупноклеточной лимфомы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
3.3.2 Ассоциация метилирования изучаемых генов микроРНК c
лабораторными параметрами больных диффузной В-крупноклеточной
лимфомой. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 90
3.4 Прогностическое значение метилирования изучаемых генов микроРНК. . 92
3.5 Оценка сочетанности метилирования генов MIR-203, MIR-129-2,
4
MIR-34A и MIR-34B/С в опухолевой ткани диффузной В-крупноклеточной
лимфомы. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 96
3.6 Мутационный статус гена ТР53 в группе исследования. . . . . . . . . . . . . . . . 99
3.7 Оценка сочетанности метилирования изучаемых генов микроРНК и
мутаций в гене ТР53 у больных с диффузной В-крупноклеточной лимфомой. . 103
ЗАКЛЮЧЕНИЕ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106
ВЫВОДЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 120
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ. . . . . . . . . . . . . 123
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 126
СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 164
