Введение
Глава 1. Обзор литературы 15
1.1 Структура костного мозга 15
1.1.1 Современная модель кроветворения 15
1.1.1.1 Гемопоэтические кроветворные клетки 15
1.1.1.2 Схема гемопоэза 17
1.1.2 Состав микроокружения костного мозга 18
1.1.2.1 Клеточные компоненты микроокружения костного мозга 18
1.1.2.1.1 Понятие кроветворной ниши 19
1.1.2.1.2 Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки 20
1.1.2.1.3 Колониеобразующие единицы фибробластов 22
1.1.2.2 Неклеточные компоненты микроокружения костного мозга 23
1.2 Функциональные процессы, происходящие в костном мозге в норме 24
1.2.1 Роль стромального микроокружения в процессах гемопоэза 24
1.3 Патогенез гемобластозов 31
1.3.1 Понятие лейкозной стволовой клетки 31
1.3.2 Патогенез острых лейкозов 32
1.3.3 Патогенез хронического миелолейкоза 33
1.4 Терапия гемобластозов 34
1.4.1 Основные препараты, применяемые в терапии острых лейкозов 34
1.4.2 Основные препараты, применяемые в терапии хронического миелолейкоза 35
1.5 Функциональные процессы, происходящие в костном мозге при гемобластозах 36
1.5.1 Функционирование стромального микроокружения при гемобластозах 36
1.5.1.1 Роль стромального микроокружения в развитии острых лейкозов 36
1.5.1.2 Роль стромального микроокружения в развитии ХМЛ 40
1.5.2 Взаимодействие лейкозных стволовых клеток со стромальным микроокружением 40
1.5.2.1 Влияние ЛСК на строму при острых лейкозах 40
1.5.2.2 Влияние ЛСК на строму при ХМЛ 45
1.5.3 Процессы, происходящие в костном мозге при воздействии химиотерапии 46
1.5.3.1 Влияние цитостатических препаратов на стромальное микроокружение 46
1.5.3.2 Защитные механизмы стромальных клеток от воздействия химиопрепаратов 47
1.6 Заключение обзора литературы 48
Глава 2. Материалы и методы 50
2.1 Клиническое исследование 50
2.1.1 Дизайн исследования 50
2.1.2 Характеристика больных 51
2.2 Лабораторные исследования 53
2.2.1 Получение и характеристика ММСК 53
2.2.2 Получение и характеристика КОЕф 54
2.2.3 Анализ относительного уровня экспрессии генов 54
2.2.4 Выделение РНК 54
2.2.5 Построение комплементарных цепей ДНК 56
2.2.6 Выполнение ПЦР 56
2.3 Статистический анализ. 61
Глава 3. Результаты и обсуждение 64
3.1 Клинические характеристики пациентов 64
3.2 Лабораторные исследования
3.2.1 Морфологические характеристики ММСК 65
3.2.2 Культуральные характеристики ММСК 66
3.2.2.1 Время достижения конфлюэнтности после первичной посадки мононуклеаров (время до Р0) 66
3.2.2.2 Суммарная клеточная продукция за 3 пассажа 69
3.2.3 Экспрессия генов в ММСК 71
3.2.3.1 Отличительные характеристики экспрессии генов в ММСК 71
3.2.3.1.1 Гены, экспрессия которых на нулевой точке была повышена 72
3.2.3.1.2 Гены, экспрессия которых на нулевой точке была нормальной 84
3.2.3.1.3 Гены, экспрессия которых на нулевой точке была снижена 92
3.2.3.2 Анализ экспрессии генов в ММСК больных различными нозологиями в зависимости от статуса заболевания 95
3.2.3.3 Анализ различия экспрессии генов в ММСК больных различными нозологиями в зависимости от протокола терапии 97
3.2.4 Концентрация КОЕф 98
3.2.5 Экспрессия генов в КОЕф 100
3.2.5.1 Особенности экспрессии генов в КОЕф 100
3.2.5.2 Анализ экспрессии генов в КОЕф больных различными нозологиями в зависимости от статуса заболевания 105
Заключения 108
Выводы 111
Приложения 113
Список литературы
