Введение
1. Воспалительные заболевания органов женской репродуктивной системы и молекулярно-генетические маркеры в диагностике вагинитов и хронического эндометрита (обзор литературы) 21
1.1 Клинико-эпидемиологические аспекты воспалительных заболеваний слизистой влагалища и эндометрия 21
1.1.1 Воспалительные заболевания слизистой влагалища: распространение, симптомы, этиология и факторы риска развития заболевания 21
1.1.2 Современные представления о микробиоценозе влагалища у женщин репродуктивного возраста 24
1.1.3 Хронический эндометрит: распространение, патогенез и факторы риска развития заболевания 29
1.2 Механизмы иммунной защиты половых путей женщин 32
1.3 Клинико-лабораторная диагностика вульвовагинитов и хронического эндометрита 53
1.3.1 Диагностика воспалительных заболеваний нижних отделов органов женской репродуктивной системы 53
1.3.2 Клинико-лабораторная диагностика хронического эндометрита 60
1.4 Методы исследования маркеров локальных воспалительных процессов 62
1.4.1 Микроскопия мазков с подсчетом числа лейкоцитов 64
1.4.2 Метод лазерной проточной цитометрии с применением моноклональных антител 65
1.4.3 Метод иммуноферментного анализа. 66
1.4.4 Технология мультиплексного иммуноанализа для исследования цитокинового профиля генов иммунного ответа 68
1.4.5 Методы иммуногистохимического исследования 69
1.4.6 Определение транскрипционных профилей генов 70
1.4.7 Полиморфизмы генов иммунной системы и современные методы их идентификации 72
1.4.8 Ассоциация полиморфизмов генов иммунной системы с предрасположенностью к развитию инфекционно-воспалительных заболеваний нижних отделов органов женской репродуктивной системы 81 Резюме 84
2. Материалы и методы 85
2.1 Материалы исследования 85
2.2 Объем исследования 85
2.3 Методы исследования 88
2.3.1 Определение состава микрофлоры влагалища 88
2.3.2 Определение транскрипционного профиля генов иммунного ответа 90
2.3.3 Определение замен одиночных нуклеотидов 91
2.3.4 Дополнительные клинико-лабораторные методы 91
2.4 Параметры, используемые для описания ПЦР в реальном времени 92
2.5 Нормировка 92
2.6 Статистика 93
2.7 Метод бинарной логистической регрессии 94
2.8 ROC-анализ 95
2.9 Характеристики диагностических тестов 95
3. Результаты собственных исследований 97
3.1 Разработка систем для оценки профиля экспрессии мРНК генов иммунной системы 97
3.1.1 Подбор праймеров и флуоресцентно-меченных проб 97
3.1.2 Проверка праймеров и зондов 101
3.1.3 Выбор референсных генов и разработка алгоритмов нормировки, оптимальных для оценки уровней экспрессии мРНК генов человека в тканях эндометрия и влагалища 106
3.1.4 Апробация метода исследования транскрипционных профилей на образцах тканей эндометрия двух стадий менструального цикла 107
3.2 Прикладные аспекты идентификации молекулярно-генетических маркеров с использованием ПЦР в реальном времени 113
3.2.1 Воспалительные заболевания нижних отделов половых путей 113
3.2.1.1 Характеристика состава микробиоценоза влагалища небеременных женщин 114
3.2.1.2 Характеристика состава микробиоценоза влагалища беременных женщин 116
3.2.1.3 Типирование и количественная оценка лактобактерий 119
3.2.1.4 Транскрипционные профили генов иммунного ответа в соскобах отделяемого слизистой влагалища 123
3.2.1.5 Характеристика уровней представленности транскриптов генов иммунного ответа в соскобах отделяемого слизистой влагалища. 123
3.2.1.6 Зависимость транскрипционных профилей от стадии менструального цикла 125
3.2.1.7 Сравнение транскрипционных профилей генов иммунной системы в клетках вагинальных соскобов у беременных и небеременных женщин 126
3.2.1.8 Особенности экспрессии мРНК генов иммунной системы в клетках вагинальных соскобов в норме, при вагините и БВ 127
3.2.1.9 Корреляция Lactobacilus iners с уровенем экспрессии генов 131
3.2.1.10 Разработка способа оценки локальной воспалительной реакции 133
3.2.1.11 Преимущества использования индексов и интегральной оценки локального воспаления 136
3.2.1.12 Сравнение предложенного способа оценки локальной воспалительной реакции с клиническими данными 139
3.2.1.13 Сравнение предложенного способа оценки локальной воспалительной реакции с методом подсчета числа лейкоцитов в мазке 143
3.2.2 Осложнения родов и послеродового периода у пациенток с вагинитами и Ureaplasma spp. в количестве более 104 ГЭ/мл 144
3.2.3 Определение ассоциаций полимофизмов генов цитокинов с предрасположенностью к развитию вагинитов 146
3.2.4 Хронический эндометрит 154
3.2.4.1 Идентификация микроорганизмов в полости матки 154
3.2.4.2 Локальный транскрипционный профиль при хроническом эндометрите 156
4. Обсуждение результатов 164
4.1. Молекулярно-генетические маркеры при вагинитах 164
4.1.1. Транскрипционный профиль генов иммунного ответа в норме и его зависимость от фазы менструального цикла в тканях эндометрия 164
4.1.2. Зависимость транскрипционных профилей генов иммунного ответа в клетках соскобов из влагалища от беременности 167
4.1.3. Доминирование в составе биоценозов влагалища лактобактерий – механизм защиты плода и новорожденного от условно-патогенных микроорганизмов 168
4.1.4. Ассоциация L.iners и L.gasseri с дисбиотическими и воспалительными процессами во влагалище 170
4.1.5. Транскрипционные профили в клетках соскобов слизистой влагалища при вагинитах 173
4.1.6. TNF, TLR4, GATA3 и IL18 – маркеры объективной интегральной оценки локальной воспалительной реакции во влагалище 180
4.1.7. Актуальность определения дисбиотических и воспалительных процессов во влагалище для прогнозирования и предупреждения акушерских осложнений 183
4.1.8. Генетически обусловленная пониженная экспрессия TNF- и TGF-1 – фактор предрасположенности к развитию вагинитов 184
4.2. Молекулярно-генетические маркеры при хроническом эндометрите 187
4.2.1. Особенности транскрипционного профиля генов иммунного ответа при фиброзе стромы эндометрия 187
4.2.2. Роль инфекционных агентов в патогенезе хронического эндометрита 189
4.2.3. Особенности транскрипционных профилей при полном симптомокомплексе хронического эндометрита и лимфоидной инфильтрации стромы 190
Выводы 193
Список литературы 204
