Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 15
1.1. Историческая справка 15
1.2. Характеристика ВЛП 17
1.2.1. Классификация 17
1.2.2. Морфология и физические свойства 19
1.2.3. Организация генома и свойства кодируемых белков 20
1.2.4. Репликация вируса 22
1.2.5. Устойчивость 25
1.2.6. Антигенные свойства 26
1.2.7. Культивирование 28
1.3. Генетическая вариабельность штаммов ВЛП 29
1.3.1. Сравнительный нуклеотидный анализ гена env вирусных изолятов ВЛП подгрупп A-J 30
1.3.2. Филогенетические отношения изолятов ВЛП 32
1.4. Клинические признаки 33
1.5. Паталогоанатомические и гистологические изменения 36
1.6. Эпизоотологические особенности ВЛП 39
1.6.1. Распространение 41
1.6.2. Вирусоносительство 43
1.6.3. Пути передачи 44
1.7. Методы диагностики влп 47
1.8. Иммунитет 50
1.9. Меры борьбы и профилактики 53
1.10. Заключение по обзору литературы 55
ГЛАВА 2. Материалы и методы 58
2.1. Материалы 58
2.1.1. Штаммы и изоляты вирусов ВЛП 58
2.1.2. Культуры клеток 59
2.1.3. Растворы и реагенты 60
2.1.4 Реагенты и наборы для молекулярной биологии 61
2.2. МЕТОДЫ 63
2.2.1. Сбор образцов. 63
2.2.2. Приготовление культур клеток 64
2.2.3. Выделение и идентификация ВЛП 64
2.2.4. Выявление группоспецифического антигена р27 ВЛП в сыворотке крови кур методом ИФА 65
2.2.5. Выявление антител к вирусу лейкоза птиц подгруппы-J 65
2.2.6. Определение стерильности 65
2.2.7. Замораживание клеток 65
2.2.8. Выделение суммарной РНК. 66
2.2.9. Полимеразная цепная реакция, совмещенная с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) 67
2.2.10. Электрофорез ДНК в агарозном геле 67
2.2.11. Конструирование рекомбинантной плазмиды 68
2.2.13. Секвенирование амплифицированных фрагментов кДНК 71
2.2.14. Компьютерный анализ и сравнение первичных нуклеотидных последовательностей 72
2.2.15. Статистическая обработка результатов 72
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 73
3.1. Мониторинг птицеводческих хозяйств на наличие ретровирусных инфекций на территории Российской Федерации 73
3.2. Разработка тест-системы на основе ПЦР для выявления и дифференциации вируса лейкоза птиц подгрупп A-D и J 81
3.3. Изоляция и характеристика полевых изолятов вируса лейкоза птиц, циркулирующих на территории России в 2009-2011 гг. 92
3.4. Определение и сравнительный анализ первичной структуры вариабельной области гена envelope изолятов вируса лейкоза птиц, выделенных на птицефабриках России в 2009-2011 гг. 97
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 101
Выводы 109
Список литературы 111
