Введение
Обзор литературы 9
Организация генома втм и вирусный цикл 9
Плазмодесмы и тб втм 11
Тб-обусловленный транспорт вирусной рнк 14
Клеточные компоненты,участвующие в танспорте 16
Роль телец включения 17
Роль микротрубочек 19
Роль микрофиламентов 20
Другие хозяйские факторы, участвующие в 21
Инфекции функциональные домены тб втм 21
Фосфорилирование в растениях 23
Ратительные мап киназы 25
Общая характеристика 25
Мапк 28
Мкк 30
Sipk и wipk-киназы, участвующие в ответе на стресс 31
Растительные казеиновые киназы i и ii (кк1 и кк2) 33
Фосфорилирование тб фитовирусов 34
Фосфорилирование ТБ ВТМ 36
Материалы и методы 38
Анализ пептидов 38
Кинирование белков и получение триптических пептидов 38
Двумерное картирование пептидов и фосфоаминокислотный анализ 38
ВЭЖХ 39
Анализ аминокислотной последовательности пептидов 39
Выделение препаратов различных клеточных фракций 40
Получение препарата фракции клеточных стенок 40
Получение препарата фракции Р30 40
Получение микросомальных фракций 40
Анализ микросомальных фракций 40
Кинирование in vitro 40
Анализ влияния двухвалентных катионов на киназную активность 41
Анализ присутствия ВІР 41
Фосфорилирование in vitro 41
Протеинкиназа С 41
Фракция клеточных стенок 41
Кинирование в геле 42
Получение рнп-комплексов 42
Анализ рнп на нитроцеллюлозных фильтрах 42
Выделение и заражение протопластов 43
Конструирование плазмид 44
Получение конструкций с С-концевыми мутантами 44
Получение конструкций с мутациями в положении 104 45
Транскрипция, заражение растений и анализ заражения 46
АСМ 47
Формирование РНП 47
Измерения с помощью АСМ 47
Работа с агробактериями 47
Трансформация агробактерий 47
Агроинфильтрация 47
Изучение стабильности белков 48
Получение антител к вір 48
Круговой дихроизм 49
Результаты и обсуждение 50
Изучение влияния с-конца тб втм на свойства рнп 50
Определение структуры комплексов рнк-тб втм методом асм 53
Изучение роли с-концевых аминокислот тб в транспорте втм 58
Характеристика киназнои активности эр-обогащенных фракций 60
Определение сайтов фосфорилирования тб втм 62
Микросомальной фракцией изучение влияния треонина в положении 104 66
Транспортные свойства тб втм изучение стабильности мутантных тб 70
Выводы 72
