ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................. 13
1.1. Современные представления о структуре фибриногена ................................. 13
1.1.1. Структура молекулы фибриногена ............................................................. 13
1.1.2. Полимеризация фибрина, опосредованная тромбином ............................ 15
1.1.3. Продольная агрегация мономеров фибрина: роль D:D взаимодействий 17
1.1.4. Взаимодействия αС-областей при образовании волокон фибрина ......... 18
1.1.4. Ветвление протофибрилл – образование трехмерной структуры
фибринового геля .................................................................................................... 19
1.1.6. Взаимодействие фибрин(оген)а с клетками и плазменными белками .... 21
1.2. Роль фибриногена в воспалительном процессе ............................................... 22
1.2.1. Фибриноген – фактор свертывания крови с провоспалительной ролью 22
1.2.2. Фибриноген и воспаление ............................................................................ 24
1.2.3. Фибриноген как фактор риска сердечно-сосудистых заболеваний ......... 25
1.2.4. Механизмы участия фибриногена в инициировании и развитии
новообразований ..................................................................................................... 26
1.2.5. Роль фибриногена в развитии неврологических заболеваний с
нарушением ГЭБ ..................................................................................................... 27
1.3. Активные формы кислорода и окисление белков ........................................... 29
1.3.1. Окислительная модификация белковых молекул ..................................... 29
1.3.2. Окислительные посттрансляционные модификации аминокислотных
остатков .................................................................................................................... 31
1.3.3. Роль остатков цистеина и метионина в поддержании стабильности
внутриклеточных белков ........................................................................................ 34
1.3.4. Антиоксидантный потенциал белков плазмы крови ................................. 35
1.3.5. Нарушение структуры и функции фибриногена при окислении ............. 36
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ...................................................................... 41
2.1. Материалы ........................................................................................................... 41
2.2. Методы ................................................................................................................. 41
2.2.1. Спиртовое выделение фибриногена ........................................................... 41
2.2.2. Осаждение фибриногена из плазмы глицином .......................................... 42
2.2.3. Выделение FXIII из плазмы крови человека .............................................. 42
3
2.2.4. Выделение плазминогена из плазмы крови человека ............................... 43
2.2.5. Окисление фибриногена О3 ......................................................................... 43
2.2.6. Окисление фибриногена H2O2 ..................................................................... 44
2.2.7. Окисление фибриногена HOCl/–OCl ........................................................... 44
2.2.8. Измерение спектров поглощения образцов окисленного фибриногена . 44
2.2.9. Ковалентная сшивка полипептидных цепей фибрина, катализируемая
FXIIIa ........................................................................................................................ 45
2.2.10. Накопление продуктов деградации молекул фибриногена под
действием плазмина ................................................................................................ 45
2.2.11. Оценка скорости образования и плазминового гидролиза фибрина ..... 45
2.2.12. Исследование изменений структуры фибринового геля методом
упругого светорассеяния ........................................................................................ 46
2.2.13. Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия .............................. 47
2.2.14. Подготовка образцов и анализ методом ВЭЖХ-МС/МС ....................... 47
2.2.15. Анализ результатов ВЭЖХ-МС/МС ......................................................... 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ..................................................... 50
3.1. Окисление фибриногена, индуцированное O3 ................................................. 50
3.1.1. Влияние окисления на целостность полипептидных цепей фибриногена
................................................................................................................................... 50
3.1.2. Окисление остатков ароматических аминокислот фибриногена............. 50
3.1.3. Окислительная модификация фибриногена: общие аспекты,
аминокислотные остатки и структурные участки ............................................... 51
3.2. Окисление фибриногена, индуцированное H2O2 ............................................. 56
3.2.1. Влияние окисления на целостность полипептидных цепей фибриногена
................................................................................................................................... 56
3.2.2. Влияние окисления на ковалентную сшивку γ и α цепей фибрина ......... 57
3.2.3. Влияние окисления на гидролиз молекул фибриногена плазмином ....... 57
3.2.4. Изменение структуры фибрина, образованного из окисленного Н2О2
фибриногена ............................................................................................................ 57
3.2.5. Окислительные модификации фибриногена, индуцированные
окислением Н2О2 ..................................................................................................... 58
3.3. Индуцированное HOCl/—OCl окисление фибриногена: влияние на структуру
и функционирование .................................................................................................. 61
3.3.1. Кинетика превращения фибриногена в фибрин и гидролиз фибрина
плазмином ................................................................................................................ 61
4
3.3.2 Влияние окисления фибриногена на морфологию фибрина ..................... 63
3.3.3. Влияние окисления на структуру окисленной фибриновой сети методом
УСР ........................................................................................................................... 64
3.3.4. Масс-спектрометрический анализ окислительной модификации
молекула фибриногена, индуцированной HOCl/—OCl. ...................................... 66
3.4. Обсуждение результатов .................................................................................... 71
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ............................................................................................................. 85
ВЫВОДЫ ....................................................................................................................... 88
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ................................ 90
CПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................................. 91
