Введение
2. Обзор литературы. Секреция белков у Bacillus subtilis. Свойства секреторных белков
2.1. Введение 6
2.2. Какие белки секретируются? 8
2.3. Структура сигнального пептида в целом 9
2.4. Классификация сигнальных пептидов 11
2.4.1. Определение предположительных сигнальных пептидов компьютерными методами 11
2.4.2. Сигнальные пептиды белков, транспортирующихся через главный секреторный путь (Sec-систему) 17
2.4.3. Сигнальные пептиды, несущие мотив с двумя аргининовыми остатками (RR-мотив) 18
2.4.4. Сигнальные пептиды липопротеинов 20
2.4.5. Сигнальные пептиды препилин-подобных белков 24
2.4.6. Сигнальные пептиды бактериоцинов и феромонов 28
2.5. Количество транспортируемых белков 28
2.6. Sec-зависимая секреторная система 32
2.6.1. Цитозольные шапероны 32
2.6.1.1. Шапероны, специфически участвующие в секреции 3 2
2.6.1.2. Шапероны широкого спектра действия 34
2.6.2. Транслоказа 36
2.6.3. Сигнальные пептидазы типа I 39
2.6.4. Процессинг липопротеинов СПазой типа II 42
2.6.5. Пептидазы сигнальных пептидов 43
2.6.6. Внецитоплазматические катализаторы фолдинга белков 44
2.6.6.1 .Петидил-пролил цис-транс изомеразы 44
2.6.6.2. Тиол-дисульфид оксидоредуктазы 45
2.6.6.3. Пропептиды 46
2.6.6.4. Другие катализаторы фолдинга (небелковой природы) 46
2.7. Контроль качества транспортируемых белков 46
2.8. Sec-независимый экспорт белков 51
2.8.1. Tat-система транспорта 51
2.8.2. Система экспорта препилин-подобных белков 53
2.8.3. ABC-система транспорта 54
2.9. Роль пропептида в секреции белков 55
2.10. Экспорт белков, локализованных в клеточной стенке 60
2.10.1. Сигналы для удержания белков в клеточной стенке 60
2.10.2. Ковалентное связывание с клеточной стенкой 61
2.11. Транспорт белков во время споруляции 62
2.11.1. Транспорт белков, специфичных для процесса споруляции 62
2.11.2. Факторы, участвующие в споруляционно-зависимом транспорте белков 63
3. Материалы и методы исследования 64
3.1. Материалы 64
3.2. Методы 66
4. Результаты и обсуждение 85
4.1. Экспрессия гена глутамилэндопептидазы gseBL из Bacillus licheniformis 85
4.1.1. Получение предшественника GseBL в клетках Е. coli 85
4.1.2. Экспрессия гена gseBL в клетках L-форм P. mirabilis 90
4.2. Экспрессия гена cpt из Thermoactinomyces vulgaris 101
4.2.1. Экспрессия модифицированного гена cpt в клетках L-форм P. mirabilis 101
4.2.2. Экспрессия гена cpt в клетках В. subtilis 107
5. Заключение 110
6. Выводы 112
7. Благодарности 113
8. Список литературы 114
