Введение
2. Обзор литературы 10
2.1. Историческая справка и современная таксономия пестивирусов 10
2.2. Пограничная болезнь мелкого рогатого скота 13
2.2.1. Клинические признаки пограничной болезни 17
2.2.2. Молекулярно-генетическая характеристика вируса пограничной болезни 18
2.2.2.1. Структура вириона. Прикрепление и проникновение пестивируса в клетку 18
2.2.2.2. Геном пестивирусов 19
2.2.2.3. Генетическое и антигенное родство возбудителя пограничной болезни с другими пестивирусами 22
2.2.3. Характеристика биотипов 25
2.2.4. Методы лабораторной диагностики пестивирусной инфекции мелкого рогатого скота 26
2.2.5. Иммунитет и вакцинопрофилактика 29
2.3. Вирусная диарея – болезнь слизистых у мелкого рогатого скота 31
2.4. Хоби вирус – Pestivirus H –– Атипичный пестивирус 36
2.5. Контаминация биологических продуктов пестивирусами 37
2.6. Заключение по обзору 39
3. Собственные исследования 40
3.1. Материалы и оборудование 40
3.1.1. Материал для исследования 40
3.1.2. Вирусы 41
3.1.3. Культуры клеток 41
3.1.4. Питательные среды и растворы 41
3.1.5. Коммерческие наборы 42
3.1.6. Реактивы 42
3.1.7. Буферные растворы 42
3.1.8. Лабораторная посуда 42
3.1.9. Лабораторное оборудование 43
3.2. Методы исследования 44
3.2.1. Отбор, хранение и подготовка проб 44
3.2.2. Культивирование культур клеток 45
3.2.3. Культивирование вирусов 45
3.2.4. Серологические исследования 46
3.2.4.1. Реакция иммунофлуоресценции 46
3.2.4.2. Реакция диффузионной преципитации в агаровом геле 46
3.2.5. Молекулярно-генетические методы исследования 47
3.2.5.1. Выделение РНК 47
3.2.5.2. Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией 47
3.2.5.3. Электрофорез нуклеиновых кислот 51
3.2.5.4. Филогенетический анализ 51
4. Результаты собственных исследований 53
4.1. Выявление антител к пестивирусам в пробах сыворотки крови овец и коз с помощью реакции диффузионной преципитации в агаровом геле 55
4.2. Реакция диффузионной преципитации в агаровом геле с контрольными антигенами 59
4.3. Выделение вируса в культурах клеток 61
4.3.1. Идентификация вируса в культурах клеток методом иммунофлуоресценции 64
4.3.2. Выявление вируса в культурах клеток с помощью реакции диффузионной преципитации в агаровом геле 66
4.4. Идентификация и типирование вирусных изолятов 70
4.4.1. Выявление вируса пограничной болезни овец методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией 70
4.4.2. Определение нуклеотидных последовательностей и филогенетический анализ вируса пограничной болезни овец 72
4.4.3. Идентификация возбудителя вирусной диареи 3-го генотипа – Хоби вируса 76
5. Обсуждение результатов 82
6. Заключение 88
7. Рекомендации и перспективы дальнейшей разработки темы 89
8. Практические предложения 90
9. Выводы 91
10. Список сокращений и условных обозначений 93
11. Список литературы 95
12. Приложения 118
