Введение
Глава 1. Литературный обзор . 13
1.1. Некоторые аспекты амилоидогенеза при болезни Альцгеймера 13
1.2. Нейромедиаторные системы и их роль в нейропатологии . 18
1.2.1. Ацетилхолинергическая нейромедиаторная система 18
1.2.2. Глутаматергическая нейромедиаторная система 19
1.2.3. Серотонинергическая нейромедиаторная система 21
1.3. Терапия болезни Альцгеймера 22
1.3.1. Холинергическая терапия . 23
1.3.2. Модуляторы глутаматергической системы 26
1.3.3. Терапия ноотропными препаратами 27
1.3.4. Противовоспалительная и гормональная терапия 29
1.3.5. Антиамилоидная стратегия терапии 30
1.4. Биологическая активность среди производных карбазола . 31
1.4.1. Противоопухолевая и антиканцерогенная активности 31
1.4.2. Противомикробная активность 34
1.4.3. Противовоспалительная активность 35
1.4.4. Нейропротекторная активность 36
Глава 2. Материалы и методы исследования 41
2.1. Материалы исследования . 41
2.1.1. Экспериментальные животные 41
2.1.2. Материалы для in vitro исследований 42
2.2. Исследуемые соединения 42
2.3. Определение когнитивно-стимулирующих свойств фторсодержащих производных тетрагидрокарбазолов . 52
2.3.1. Тест «Новая клетка». 52
2.3.2. Тест «Узнавание новой локализации известного объекта 53
2.3.3. Тест «Условный рефлекс пассивного избегания» 53
2.4. Изучение двигательной активности, ориентировочно-исследовательского поведения и уровня ситуативной тревожности животных в тесте «Открытое поле» 54
2.5. Определение острой токсичности исследуемых соединений 55
2.6. Изучение влияния соединений на глутаматные NMDA-рецепторы 55
2.7. Определение концентрации белка по методу Лоури. 57
2.8. Изучение действия химических соединений на каталитическую активность моноаминоксидазы формы А и В 57
2.9. Исследование ингибиторной активности соединений к ацетилхолинэстеразе и бутирилхолинэстеразе 58
2.10. Определение интенсивности перекисного окисления липидов 59
2.11. Определение антирадикальной активности соединений методом хемилюминесценции. 60
2.12. Исследование мембранотропной активности изучаемых соединений 62
2.12.1. Приготовление суспензии фосфатидилхолиновых липосом 62
2.12.2. Исследование мембранотропности исследуемых соединений по регистрации тушения флуоресценции зондов 63
2.13. Исследование нейропротекторного действия изучаемых веществ на трансгенных животных 5xFAD с моделью болезни Альцгеймера. 63
2.13.1. Генотипирование трансгенных животных. 63
2.13.2. Гистологические методы исследований 65
2.13.2.1. Взятие мозга, фиксация и приготовление срезов 65
2.13.2.2. Окраска срезов и подсчет амилоидных бляшек 65
2.14. Статистический анализ.. 66
Глава 3. Результаты и обсуждение 67
3.1. Исследование когнитивно-стимулирующей активности новых фторсодержащих производных тетрагидрокарбазолов 67
3.1.1. Изучение влияния новых фторсодержащих производных тетрагидрокарбазолов на ориентировочное поведение животных в тесте «Новая клетка» 67
3.1.2. Исследование когнитивно-стимулирующего действия фторсодержащих производных тетерагидрокарбалозов на аутбредных мышах CD1 в тесте «Узнавание новой локализации известного объекта» 71
3.1.3. Изучение влияния исследуемых соединений на гиппокамп-зависимую память аутбредных мышей CD1 в тесте «Условный рефлекс пассивного избегания» 75
3.1.4. Оценка влияния исследуемых соединений на двигательную активность, уровень ситуативной тревожности и ориентировочно-исследовательское поведение аутбредных мышей CD1 в тесте «Открытое поле» 77
3.2. Сравнительная оценка терапевтической эффективности исследуемых соединений-лидеров с препаратами сравнения мемантином и димебоном в тестах «Узнавание новой локализации известного объекта» и «Открытое поле». 82
3.3. Определение основных параметров острой токсичности соединений СА-7043х и СА-7050х 86
3.4. Исследование возможных механизмов действия соединений СА-7043х и СА-7050х 90 3.4.1. Изучение ингибиторной активности соединений СА-7043х и СА-7050х в отношении ацетилхолинэстеразы и бутирилхолинэстеразы 90
3.4.2.Изучение влияния исследуемых соединений на связывание с NMDA подтипом глутаматных рецепторов 92
3.4.3. Изучение влияния СА-7043х и СА-7050х на процесс перекисного окисления липидов и тушения свободных радикалов 95
3.4.4. Изучение влияния соединений CA7043x и CA7050x на каталитическую активность МАО-В и МАО-А 99
3.4.5. Изучение взаимодействия соединений СА-7043х и СА-7050х с фосфолипидной мембраной 102
3.5. Исследование нейротропного действия СА-7043х и СА-7050х на трансгенных животных 5хFAD 106
3.5.1. Оценка влияния исследуемых производных на трансгенных мышах при однократном введении 106
3.5.1.1. Изучение влияния соединений СА-7043х и СА-7050х на угашение ориентировочной активности трансгенных мышей 5хFAD в тесте «Новая клетка» 106
3.5.1.2. Оценка влияния соединений СА-7043х и СА-7050х на гиппокамп-зависимую память трансгенных мышей 5хFAD в тесте «Узнавание новой локализации известного объекта» 108
3.5.1.3. Оценка влияния соединений СА-7043х и СА-7050х на двигательную активность, уровень ситуативной тревожности и ориентировочно-исследовательское поведение трансгенных мышей 5xFAD в тесте «Открытое поле» 109
3.5.2. Изучение влияния многократного введения исследуемых соединений СА-7043х и СА-7050х на поведение трансгенных животных 5хFAD 111
3.5.2.1. Оценка влияния соединений СА-7043х и СА-7050х на гиппокамп-зависимую память мышей 5хFAD в тесте «Узнавание новой локализации известного объекта» 112
3.5.2.2. Оценка влияния соединений СА-7043х и СА-7050х на двигательную активность, уровень ситуативной тревожности и ориентировочно-исследовательское поведение трансгенных мышей 5xFAD в тесте «Открытое поле» 113
3.5.2.3. Изучение влияния соединений СА-7043х и СА-7050х при многократном введении на изменение массы тела трансгенных животных 5xFAD 118
3.5.2.4. Изучение влияния соединений СА-7043х и СА-7050х при многократном введении на образовние амилоидных бляшек в гиппокампе и коре головного мозга трансгенных животных 5xFAD 120
Заключение 122
Выводы 123
Практические рекомендации 124
Список литературы 125
