Введение
1. Классификация хроматографических методов. основные положения теории хроматографии 6
1. Оптимальные условия хроматографического разделения 7
2. Гель-проникащая хроматография 8
1. Стационарные фазы для высокоэффективной гель-проникащей хроматографии 8
1.1. Неорганические поверхностно-модифицированные носители. 9
1.2. Жесткие органические носители для гель-проникащей хроматографии 10
2. Свойства носителей для гель-проникащей хроматографии 10
3. Ионообменная хроматография 14
1. Носители для ионообменной хроматографии 16
1.1. Ионообменники с органической полимерной матрицей 16
1.2. Поверхностно-модифицированные неорганические ионообменники 17
2. Буферные системы для ионообменной хроматографии. Методы воздействия на хроматографическое разделение белков 20
3. Практическое применение высокоэффективной ионообменной хроматографии 22
3.1. Разделение изоферментов 22
3.2. Разделение гемоглобинов
4. Обратнофазная хроматография 26
1. Методы получения обратнофазных носителей 26
2. Общая характеристика обратнофазных носителей 30
3. Влияние диаметра пор матрицы и процентного содержания углерода на разделение белков методом обратнофазной хроматографии 32
4. Сольвофобная хроматография на обратнофазных носителях. 33
5. Ион-парная хроматография 35
5.1. Ион-парная хроматография пептидов и белков 37
6. Буферные системы для обратнофазной хроматографии 37
6.1. Буферные системы для разделения пептидов и белков 39
4. Разделение белков методом 0брашжзн0й хроматографии. 42
1. Применение обратнофазной хроматографии при исследовании гомологичных белков 44
2. Применение высокоэффективной хроматографии при исследовании структуры белков 46
1. Материалы 52
2. Методы 52
3. Разделение пептидов бромцианового расщепления фрагмента Т-5 обратнофазной хроматографией 57
4. Разделение продуктов гидролиза G-фактора трипсином по остаткам аргинина 58
5. Выделение пептидов избирательным связыванием с инертным носителем 60
6. Блокирование первичных аминогрупп пептидов флуореокамином 61
1. Разделение бромциановых ішгщцов фрагмента т-5 фактора Элонгации ef-g методами высокоэффективной шщкостной хроматографии 64
2. Разделение продуктов гвдролиза ef-g трипсином по остаткам аргинина методом обратнофазной хроматографии 73
3. Выделение пепгвдов путем избирательного связывания с твердофазным носителем 77
4. Автоматический анализ аминокислотных последовательностей пепгвдов, полученных после расщепления ef-g по связи asp-pro. Блокирование неспецифического расщепления флжскамижм. 83
5. Реконструкция секвесторов для повышения чувствительнос ти, эффективности и надежности автоматической деградации по эдоану 88
Выводы 92
