Введение
Глава 1 Обзор литературы 22
1.1 Биологические маркеры рака молочной железы: от рецепторов стероидных гормонов до мультигенных тестов 22
1.2 Молекулярно-генетические механизмы чувствительности и резистентности к терапии тамоксифеном эстроген-зависимого рака молочной железы 26
1.2.1 Структурная организация и функционирование эстрогенового рецептора 26
1.2.2 Генетические аберрации ESR1 29
1.2.3 Молекулярно-генетические изменения внутриклеточных регуляторов ER 34
1.2.4 Взаимодействие между сигнальными каскадами рецепторов факторов роста и ER 38
1.3 Факторы прогноза, ассоциированные с особенностями клинического течения и ответом на неоадъювантную химиотерапию эстроген-независимого рака молочной железы 43
1.3.1 Гетерогенность тройного негативного рака молочной железы 43
1.3.2 Предсказательная значимость существующих молекулярно-генетических маркеров эффективности неоадъювантной химиотерапии 46
1.4 Роль PI3K/Akt/mTOR-сигнального в механизмах резистентности эстроген зависимого и эстроген-независимого рака молочной железы 50
1.4.1 Основные компоненты PI3K/Akt/mTOR сигнального пути 50
1.4.2 Особенности функционирования PI3K/Akt/mTOR-сигнального каскада при эстроген-зависимом раке молочной железы 57
1.4.3 Активация PI3K/Akt/mTOR-сигнального каскада при эстроген независимом раке молочной железы 62
1.5 Заключение по обзору литературы 64
Глава 2 Материал и методы исследования 66
2.1 Характеристика групп исследования 66
2.2 Методы исследования 73
2.2.1 Материал исследования 73
2.2.2 Выделение ДНК из образцов периферической крови 73
2.2.3 Выделение ДНК из образцов опухолевой ткани 74
2.2.4 Выделение РНК из образцов опухолевой и прилежащей нормальной ткани 75
2.2.5 Полимеразная цепная реакция и анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ) 76
2.2.6 Полимеразная цепная реакция с детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени (РТ-ПЦР) 78
2.2.7 Полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) 79
2.2.8 Иммуногистохимическое исследование 81
2.2.9 Фенотипирование методом проточной цитофлуориметрии 84
2.3 Методы статистической обработки результатов 86
Глава 3 Результаты собственных исследований и их обсуждение 88
3.1 Полиморфизм генов, вовлеченных в процессы пролиферации и апоптоза опухолевых клеток при разных молекулярных подтипах рака молочной железы 88
3.1.1 Ассоциация полиморфных вариантов гена эстрогенового рецептора ESR1 с клинико-морфологическими параметрами у больных люминальным РМЖ 88
3.1.2 Ассоциация полиморфных вариантов генов рецепторов ростовых факторов EGFR, TGF-R1, VEGFR2, IGF1R с клинико-морфологическими параметрами у больных люминальным A, B и тройным негативным РМЖ 94
3.1.3 Ассоциация полиморфных вариантов генов апоптоза и репарации ДНК, генов факторов роста и рецепторов факторов роста, а также генов ферментов фолатного цикла с клинико-морфологическими параметрами у больных люминальным A, B и тройным негативным РМЖ 101
3.2 Особенности белковой и генной экспрессии рецепторов ростовых факторов EGFR, TGF-R1, VEGFR2, IGF1R в образцах опухолевой и прилежащей нормальной ткани в зависимости от молекулярного подтипа РМЖ 114
3.3 Особенности внутриклеточной экспрессии белков Akt (pS473) и PTEN в опухолевой ткани в зависимости от молекулярного подтипа РМЖ 126
3.4 Особенности содержания субпопуляций клеток CD44+/CD24-/low, CD44 /CD24+, CD44+/CD24+, CD44-/CD24- в опухолевой ткани больных с разными молекулярными подтипами РМЖ 133
3.5 Анализ связи исследуемых молекулярно-генетических маркеров с эффективностью гормональной терапии тамоксифеном у больных эстроген зависимым РМЖ 142
3.5.1 Ассоциация полиморфных вариантов исследуемых генов с эффективностью гормональной терапии тамоксифеном 142
3.5.2 Анализ связи белковой и генной экспрессии рецепторов факторов роста с эффективностью гормональной терапии тамоксифеном 147
3.5.3 Ассоциация экспрессии белков Akt(pS473) и PTEN с эффективностью терапии тамоксифеном 152
3.5.4 Содержание субпопуляций опухолевых клеток CD44+/CD24-/low, CD44-/CD24+, CD44+/CD24+, CD44-/CD24- в зависимости от эффективности терапии тамоксифеном 155
3.5.5 Связь характера распределения ER в опухоли с ответом на тамоксифен у больных эстроген-зависимым РМЖ 158
3.5.6 Ассоциация исследуемых молекулярно-генетических маркеров с показателями безметастатической выживаемости у больных эстроген зависимым РМЖ 161
3.5.7 Математические модели прогноза клинического течения и эффективности терапии тамоксифеном у больных эстроген-зависимым РМЖ 171
3.6 Анализ связи молекулярно-генетических маркеров с эффективностью неоадъювантной химиотерапии у больных тройным негативным РМЖ 176
3.6.1 Экспрессия рецепторов факторов роста в процессе НАХТ у больных тройным негативным РМЖ 176
3.6.2 Связь полиморфных вариантов генов рецепторов факторов роста с эффективностью НАХТ 181
3.6.3 Показатели безметастатической выживаемости у больных тройным негативным РМЖ в зависимости от исследуемых маркеров 186
3.6.4 Математическая модель, позволяющая предсказывать ожидаемую эффективность НАХТ у больных тройным негативным РМЖ 189
3.7 Методологические подходы к прогнозированию исхода заболевания и предсказанию эффективности терапии РМЖ разных молекулярных подтипов 193
Заключение 199
Выводы 212
Практические рекомендации 216
Список литературы 217
