Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Рак толстого кишечника и его характеристики 10
1.2. Воспаление и онкогенный процесс 12
1.3. Цитокины как главные медиаторы воспаления, вызванного опухолевым процессом 16
Глава 2. Материалы и методы исследования 29
2.1. Реактивы и оборудование 29
2.3. Электрофорез фрагментов ДНК в агарозном геле 35
2.4. Подготовка тканевых лизатов для изоляции РНК и белков 35
2.5. Выделение РНК, обратная транскрипция и количественная ПЦР в реальном времени 35
2.6. Выделение IEL и LPL из опухолей и эпителия толстого кишечника мыши 36
2.7. Иммунофлуоресцентный анализ и сортировка клеток на проточном 37
2.8. Внутриклеточное окрашивание цитокинов 38
2.9. Сортировка иммунных и эпителиальных клеток ткани толстого кишечника мыши на проточном цитофлуориметре 38
2.10. ИФА для измерения концентрации белка ИЛ-1а и ИЛ-1р 39
2.11. Обработка мышей препаратом «Анакинра» (рекомбинантный синтетический ингибитор рецептора интерлейкина-1) 40
2.12. Подготовка и иммуногистохимическое окрашивание образцов опухолей мышей 40
2.13. Получение образцов бактериальной ДНК для секвенирования 41
2.14. Секвенирование бактериальной рРНК 41
2.15. Выделение нейтрофилов из костного мозга, селезенки и перитонеальной полости 41
2.16. Стимулирование нейтрофилов рекомбинантным белком ИЛ-10 42
2.17. Функциональный анализ фагоцитирующей и антимикробной элиминирующей способности нейтрофилов 42
2.18. Исследование нейтрофилов с помощью иммунофлюоресцентной микроскопии 43
2.20. Статистическая обработка данных 43
Глава 3. Результаты 44
3.1. Экспрессия мРНК ИЛ-1 и ИЛ-10 повышенна в популяции моноцитов в модели спонтанного РТК (рак толстого кишечника) в мышах APCdel/wt 44
3.2. Уровень цитокинов ИЛ-1а и ИЛ-10 повышен в опухолевой ткани СРТК 47
3.3. Изучения влияния ингибитора ИЛ-1R (“Анакинра») на экспрессию цитокина ИЛ-17А в иммунных фракциях опухолей толстого кишечника 48
3.4. Изучение влияние ИЛ-1 на воспаление по типу Th17 (TEI) в модели СРТК 50
3.5. Изучение влияния ИЛ-1 рецептора на развитие СРТК в модели APCflox/wt CDX2cre+ 52
3.6. Изучение влияния рецептора ИЛ-1, экспрессируемого эпителиальными клетками кишечника на развитие СРТК 55
3.7. Изучение роли сигнального пути ИЛ-1 в Т-клетках в модели СРТК 58
3.8. Изучение роли сигнального пути рецептора ИЛ-1 в клетках миелоидного ряда в модели СРТК 62
3.9. Изучение роли бактерии, ассоциированных с опухолью на развитие СРТК 66
3.10. Изучение роли ИЛ-Ж-сигнального пути в нейтрофилах в модели СРТК 78
3.11. Сигнальный путь ИЛ-1R регулирует антибактериальные функции в нейтрофилах в СРТК 83
Глава 4. Обсуждение результатов 90
Выводы 107
Список литературы 108
