Введение
Обзор литературы 7
I. Мезенхимные стромальные клетки 7
1.1. История изучения МСК 7
1.2. Идентификация и культивирование МСК 9
1.3. Мультипотентность МСК 10
1.4. Участие МСК в регенерации тканей 11
1.5. Участие МСК в формировании ниши тканеспецифических стволовых клеток 11
II. Внутриклеточная кальциевая сигнализация 12
11.1. Общие представления о внутриклеточной кальциевой сигнализации 12
11.2. Кальциевые каналы плазматической мембраны 14
11.3. Кальциевые каналы мембран кальциевых депо 15
11.4. Кальциевые насосы внешней и внутренних мембран клетки. 18
11.5. Кальциевая сигнализация в мезенхимных стромальных клетках 18
III. Адренергическая сигнальная система 19
111.1. Краткая история исследования адренергических рецепторов 19
111.2. Классификация адренергических рецепторов и активируемые ими сигнальные пути 21
111.3. Адренергические рецепторы в МСК 24
111.4. Направленный агонизм 24
IV. Пуринэргическая сигнальная система 26
IV.1. Аденозиновые (Р1) рецепторы 28
IV.2. Р2-рецепторы 28
IV.3. Пуринергическая сигнализация в МСК 31
Материалы и методы исследования 34
1. Выделение МСК из жировой ткани и их культивирование 34
2. Подготовка клеток к эксперименту 34
3. Методика и экспериментальная установка для микрофотометрии 35
4. Методика и экспериментальная установка для фотолиза химических групп (uncaging) 35
5. Стимуляция клеток агонистами з
6. Статистическая обработка данных 37
7. Методика иммунофлуоресцентного окрашивания 37
8. ОТ-ПЦР 37
Результаты и их обсуждение 40
I. Функциональная гетерогенность МСК 40
II. Механизм генерации МСК Ca2+ ответов на норадреналин 42
11.1. Фосфоинозитидный трансдукциооный каскад в ответах МСК на норадреналин 43
11.2. Зависимость ответов МСК на норадреналин от его концентрации 46
11.3. Усиление Ca2+-ответа МСК на норадреналин с помощью Ca2+-индуцированного выброса Ca2+ из внутриклеточных депо 48
11.4. Роль IP3- и рианодиновых рецепторов в генерации ответов МСК на норадреналин 52
11.5. Типы адренорецепторов, обеспечивающие чувствительность МСК к норадреналину 54
11.6. Предполагаемый механизм генерации ответов МСК на норадреналин 58
III. Механизм генерации МСК Са2+ ответов на ATP 59
111.1. Типы пуринорецепторов, обеспечивающие чувствительность МСК к ATP 59
111.2. Фосфоинозитидный трансдукционый каскад в ответах МСК на ATP 62
111.3. Зависимость амплитуды ответов МСК на ATP от его концентрации 63
111.4. Усиление Ca2+-ответа МСК на ATP с помощью Ca2+-индуцированного выброса Ca2+ из внутриклеточных депо 64
111.5. Роль IP3- и рианодиновых рецепторов в генерации ответов МСК на скачкообразное повышение концентрации внутриклеточного Ca2+ 66
111.6. Предполагаемый механизм генерации ответов МСК на ATP 67
Заключение 68
Выводы 71
Список использованных сокращений 72
Список литературы 73
