Введение
Глава 1 Создание сосудистых протезов малого диаметра: основные направления (обзор литературы) 15
1.1 Потребность в замещении сосудов малого диаметра. Основные виды сосудистых протезов 15
1.2 Биосовместимость синтетического материала – проблемы и возможные пути решения 17
1.3 Важность воссоздания эндотелиального монослоя на внутренней поверхности сосудистого протеза малого диаметра после имплантации протеза в сосудистое русло 20
1.4 Основные биологически активные вещества, используемые для модифицирования тканеинженерных сосудистых протезов 22
1.5 Природный экстрацеллюлярный матрикс и интегриновые рецепторы основная составляющая биомиметической поверхности тканеинженерных сосудистых протезов 26
1.6 Конфигурации RGD-пептидов и сопряженные с ними лиганды /линкеры, используемые для поверхностного модифицирования сосудистых протезов 28
Глава 2 Материалы и методы исследования 32
2.1 Изготовление искусственных сосудистых протезов малого диаметра 32
2.2 Процедура модифицирования внутренней поверхности полимерных сосудистых протезов 32
2.3 Оценка качества проведенного модифицирования 34
2.3.1 Оценка количества прикрепленных аминогрупп 34
2.3.2 Определение аминокислот RGD-пептида методом тонкослойной хроматографии 35
2.3.3 Определение аргинин-содержащего пептида 35
2.3.4 Определение количества аминогрупп на поверхности сосудистых протезов 36
2.4 Сканирующая электронная микроскопия внутренней поверхности сосудистых протезов до и после модифицирования RGD-пептидами 37
2.5 Физико-механические испытания 37
2.6 Оценка гемосовместимости биодеградируемых сосудистых протезов до и после модифицирования RGD-пептидами 38
2.6.1 Определение степени гемолиза эритроцитов 38
2.6.2 Оценка степени агрегации тромбоцитов 39
2.6.3 Сканирующая электронная микроскопия поверхности немодифицированных и модифицированных сосудистых протезов до и после контакта с тромбоцитами 40
2.7 Методы оценки адгезивных и цитотоксических свойств биодеградируемых матриксов в экспериментах in vitro с использованием культур эндотелиальных клеток 41
2.7.1 Культивирование эндотелиальных клеток пупочной вены человека на немодифицированных и модифицированных матриксах 41
2.7.2 Культивирование колониеформирующих эндотелиальных клеток человека на внутренней поверхности матриксов с RGD-пептидами и без таковых 43
2.7.2.1 Сканирующая электронная микроскопия поверхности матриксов до и после культивирования эндотелиальных клеток 45
2.8 Имплантация модифицированных и немодифицированных сосудистых протезов в брюшную часть аорты крыс 46
2.9 Гистологическое исследование эксплантированных модифицированных и немодифицированных сосудистых протезов 47
2.10 Изучение элементного состава кальцификатов в эксплантированных сосудистых протезах 49
2.11 Иммунофлуоресцентное окрашивание эксплантированных сосудистых протезов 50
2.12 Статистические методы анализа данных 51
Глава 3 Разработка биодеградируемого сосудистого протеза малого диаметра, модифицированного одним сочетанием «линкер – RGD-пептид»: результаты пилотного исследования 52
3.1 Оценка качества модифицирования сосудистых протезов RGD-пептидами. 52
3.1.1 Колориметрическая оценка наличия аминогрупп 54
3.1.2 Детекция аминокислотных остатков RGD-пептида 55
3.2 Топография поверхности модифицированных сосудистых протезов 56
3.3 Физико-механические свойства сосудистых протезов после модифицирования RGD-пептидом 58
3.4 Культивирование эндотелиальных клеток пупочной вены человека на немодифицированной и модифицированной поверхности матриксов 60
3.5 Результаты имплантации сосудистых протезов в аорту крыс 61
Глава 4 Характеристика сосудистых протезов из композиции полигидроксибутирата/валерата и полиапролактона, модифицированных различными вариациями «линкер – RGD-пептид» 67
4.1 Определение оптимального времени аминолиза сосудистых протезов 67
4.2 Оценка качества проведенной процедуры модифицирования сосудистых протезов 75
4.3 Физико-механические свойства сосудистых протезов, модифицированных RGD-пептидами 77
Глава 5 Результаты тестирования сосудистых протезов из композиции полигидроксибутирата/валерата и полиапролактона, модифицированных различными конфигурациями RGD-пептидов 82
5.1 Гемосовместимость RGD-модифицированных сосудистых протезов в сравнении с немодифицированными аналогами 82
5.1.1 Определение степени гемолиза эритроцитов 82
5.1.2 Анализ агрегации тромбоцитов 83
5.2 Сравнительная оценка адгезии и жизнеспособности эндотелиальных клеток пупочной вены человека, культивируемых на RGD-модифицированных матриксах и немодифицированных аналогах 87
5.3 Оценка адгезии и жизнеспособности колониеформирующих эндотелиальных клеток человека, культивируемых на RGD-модифицированных матриксах и немодифицированных аналогах 92
5.4 Результаты имплантации в аорту мелких лабораторных животных биодеградируемых сосудистых протезов с RGD-модифицированием и без такового 101
5.4.1 Интраоперационная оценка качества и постоперационный мониторинг проходимости исследуемых сосудистых протезов 101
5.4.2 Результаты гистологического и иммунофлуоресцентного исследования эксплантированных образцов сосудистых протезов. Сравнительная оценка выраженности кальцификации стенки эксплантированных протезов 103
Заключение 119
Выводы 125
Практические рекомендации 127
Список условных сокращений 128
Список литературы 130
