ВВЕДЕНИЕ................................................................................................................ 4
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................ 12
1.1 История открытия белка резистентности рака молочной железы............... 12
1.2 Структура белка резистентности рака молочной железы............................. 13
1.3 Локализация и функции белка резистентности рака молочной железы..... 18
1.4 Субстраты белка резистентности рака молочной железы............................ 24
1.5 Ингибиторы и индукторы белка резистентности рака молочной железы .. 28
1.6 Тестирование веществ на принадлежность к субстратам и ингибиторам
белка резистентности рака молочной железы.............................................................. 35
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ................................................................ 38
2.1 Клеточная линия и условия культивирования ............................................... 38
2.2 Методики количественного определения метотрексата, митоксантрона и
кверцетина методом ВЭЖХ-МС/МС и их валидация ................................................. 38
2.3 Методика количественного определения
этилметилгидроксипиридина сукцината методом ВЭЖХ-УФ и ее валидация........ 44
2.4 Методика оценки участия BCRP в транспорте метотрексата, митоксантрона
и кверцетина через монослой клеток линии Сасо-2.................................................... 45
2.5 Методика тестирования этилметилгидроксипиридина сукцината на
принадлежность к субстратам и/или модуляторам активности BCRP на клетках
линии Сасо-2 48
2.6 Методика определения относительного количества BCRP в лизате клеток
линии Сасо-2 методом вестерн-блот............................................................................. 49
2.7 Статистическая обработка полученных данных............................................ 51
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................................... 52
3
3.1 Разработка и валидация методик количественного определения субстратов
BCRP................................................................................................................................. 52
3.1.1 Разработка и валидация методики количественного определения
метотрексата в транспортный среде методом ВЭЖХ-МС/МС.................................. 52
3.1.2 Разработка и валидация методики количественного определения
митоксантрона в транспортный среде методом ВЭЖХ-МС/МС............................... 62
3.1.3 Разработка и валидация методики количественного определения
кверцетина в транспортной среде методом ВЭЖХ-МС/МС...................................... 72
3.2 Оценка транспорта метотрексата, митоксантрона и кверцетина через
монослой клеток линии Сасо-2...................................................................................... 82
3.2.1 Влияние резерпина - ингибитора BCRP на транспорт метотрексата и
митоксантрона через билипидный слой клеток Сасо-2 .............................................. 88
3.3 Модификация и валидация методики количественного определения
этилметилгидроксипиридина сукцината в транспортный среде методом ВЭЖХ-УФ
........................................................................................................................................... 92
3.4 Оценка принадлежности этилметилгидроксипиридина сукцината к
субстратам и модуляторам активности BCRP ............................................................. 98
3.4.1 Оценка влияния этилметилгидроксипиридина сукцината на количество
BCRP............................................................................................................................... 102
ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ................................................................................... 104
ВЫВОДЫ............................................................................................................... 114
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ............................................................... 115
ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ .............................. 116
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ................................................................................... 117
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ..................................................................................... 119
