Введение
1 Обзор литературы 12
1.1 Эпидемиология 12
1.1.1 Глобальное распространение вируса блютанга 12
1.1.2 Распространение блютанга на территории Российской Федерации 17
1.2 Структура вируса блютанга и его генома 19
1.3 Восприимчивые животные 30
1.4 Вирус блютанга в векторах переносчиках 32
1.5 Патогенез 36
1.6 Клинические симптомы и патологоанатомические изменения 38
1.7 Лабораторная диагностика блютанга 39
1.8 Использование молекулярно-генетических методов для
идентификации отдельных серотипов и вариантов вируса блютанга 42
1.9 Профилактика и меры борьбы 44
1.10 Мероприятия по ликвидации блютанга 46
1.11 Заключение по обзору литературы 48
2 Собственные исследования 51
2.1 Материалы 51
2.1.1 Вирусы 51
2.1.2 Специфические сыворотки крови 53
2.1.3 Культуры клеток 53
2.1.4 Животные 53
2.1.5 Патологический материал 53
2.1.6 Плазмиды и бактериальные штаммы 54
2.1.7 Реактивы 54
2.1.8 Лабораторное оборудование 55
2.2 Методы 55
2.2.1 Выделение вируса блютанга 55
2.2.1.1 Выделение вируса на куриных эмбрионах 56
2.2.1.2 Выделение вируса в культуре клеток 57
2.2.2 Типирование выделенного вируса блютанга в реакции
нейтрализации с типоспецифическими сыворотками 57
2.2.3 Определение инфекционной активности вируса блютанга в культуре клеток 58
2.2.4 Определение инфекционной активности вируса на куриных эмбрионах
2.2.5 Изучение вирулентных свойств вируса 59
2.2.6 Мониторинговые исследования 59
2.2.7 Исследование мокрецов 60
2.2.8 Иммуноферментный анализ 60
2.2.9 Подбор праймеров и зондов
2.2.10 Выделение нуклеиновых кислот 61
2.2.11 Проведение ОТ-ПЦР с детекцией продуктов амплификации методом электрофореза 61
2.2.12 Проведение ОТ-ПЦР в режиме реального времени 62
2.2.13 Молекулярное клонирование продуктов ПЦР 63
2.2.14 Нуклеотидное секвенирование 64
2.2.15 Филогенетический анализ 65
2.2.16 Статистическая обработка результатов исследований 65
3 Результаты собственных исследований 66
3.1 Выявление и характеристика изолята «Г244/11» вируса блютанга, выделенного в 2011 г. на территории Смоленской области 66
3.1.1 Выделение и идентификация изолята «Г244/11» вируса блютанга 69
3.1.2 Изучение молекулярно-генетических характеристик выделенного в Смоленской области изолята «Г244/11» 71
3.1.3 Изучение биологических характеристик изолята «Г244/11» 77
3.2 Результаты мониторинговых исследований поголовья крупного и мелкого рогатого скота на наличие генома ВБ и антител к вирусу в Смоленской и Калужской областях 83
3.3 Исследование мокрецов рода Сulicoides на территории Смоленской и Калужской областей 85
3.4 Разработка ОТ-ПЦР в режиме реального времени для идентификации вируса блютанга 14 серотипа 87
3.5 Разработка ОТ-ПЦР для идентификации нуклеотипов А, В, С
вируса блютанга 99
4 Обсуждение результатов исследований 109
5 Выводы 120
6 Практические предложения 121
7 Список сокращений и условных обозначений 122
8 Список литературы 124
