Введение
2. Обзор литературы 15
2.1. Характеристика инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых 16
2.2. Устойчивость вируса 19
2.3. Пути передачи IPNV 20
2.4. Клинические признаки 23
2.5. Инкубационный период 25
2.6. Сезонная закономерность 26
2.7. Строение генома 26
2.8. Репликация вируса 27
2.9. Профилактика и меры борьбы 29
2.10. Диагностика инфекционного некроза поджелудочной железы лососевых 30
2.10.1. Культура клеток 30
2.10.2. Реакция нейтрализации 31
2.10.3. Иммуноферментный анализ 31
2.10.4. Полимеразная цепная реакция 31
2.10.5. Иммуногистохимический анализ 32
2.11. Иммунизация 33
2.12. Заключение по литературному обзору 35
3. Собственные исследования 37
3.1. Материалы и методы 37
3.1.1. Культуры клеток 37
3.1.2. Вирус 37
3.1.3. Животные 38
3.1.4. Сыворотка 38
3.1.5. Реактивы 38
3.1.6. Буферные растворы 39
3.1.7 Лабораторное оборудование: 40
3.1.8. Культивирование перевиваемых клеточных линий рыб 41
3.1.9. Титрование вируса 44
3.1.10. Реакция нейтрализации 44
3.1.11. Накопление вируса 45
3.1.12. Очистка и концентрирование вируса 45
3.1.13. Получение иммунной сыворотки к IPNV на кроликах 45
3.1.14. Ацетонирование печени 45
3.1.15. Очистка от липидов 46
3.1.16. Определение концентрации белка 46
3.1.17. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки кролика 46
3.1.18. Получение иммунопероксидазного конъюгата к IPNV 47
3.1.19. Статистические методы 47
3.2. Культивирование различных штаммов IPNV и чувствительность разных культур клеток рыб, влияние рН на жизнеспособность вируса 47
3.3. Получение постоянной линии клеток OMG 53
3.4. Очистка и концентрирование вируса 58
3.5. Иммунизация кроликов 60
3.6. Выделение иммуноглобулинов из сыворотки кролика 63
3.7. Получение иммунопероксидазного конъюгата к IPNV 65
3.8. Определение оптимальных условий постановки «сэндвич» ИФА 69
3.9. Определение позитивно-негативного порога (ПНП) 72
3.10. Определение специфичности и чувствительности тест-системы для выявления IPN 73
3.11. Определение стабильности специфических компонентов набора при хранении 76
3.12. Испытание полученной тест-системы в производственных условиях 77
4. Обсуждение результатов исследования 79
5. Заключение 87
6. Выводы 88
7. Практические предложения 90
8 Список использованной литературы 92
9. Приложение 113
