Введение
1. Введение 5
2. Обзор литературы. Регуляция длины теломер 6
2.1. Регуляция длины теломер почкующихся дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Candida
albicans, Kluyveromyces lactis, Yarrowia lipolytica) 8
2.1.1. Строение теломер 9
2.1.2. Теломераза почкующихся дрожжей 12
2.1.3. Регуляция длины теломер Saccharomyces cerevisiae 13
2.1.4. Регуляция длины теломер других почкующихся дрожжей 21
2.2. Регуляция длины теломер делящихся дрожжей (Schizosaccharomyces pombe) 25
2.2.1. Строение теломер 25
2.2.2. Теломераза S. pombe 26
2.2.3. Регуляция длины теломер S. pombe 26
2.3. Регуляция длины теломер человека (Homo sapiens) 32
2.3.1. Строение теломер человека 32
2.3.2. Теломераза человека 33
2.3.3. Регуляция теломеразы на теломерах 33
2.4. Заключение 37
3. Результаты и обсуждение 39
3.1. Постановка задачи 39
3.2. Обратная транскрипция А170 42
3.2.1. Детекция дополнительного dT на теломерах in vivo 42
3.2.2. Влияние мутаций нуклеотида А170 HpTER на длину теломер 46
3.2.3. Обратная транскрипция А170, как способ контроля длины теломер 52
3.3. Регуляция длины теломер H. polymorpha. Теломерные белки 55
3.4. Заключение 65
4. Материалы и методы 66
4.1. Реактивы, биопрепараты, буферные растворы, олигодезоксирибонуклеотиды, штаммы 66
4.2. Методики, использованные в работе 71
4.2.1. Базовые методики работы с ДНК и клетками, клонирование 71
4.2.2. Определение последовательностей теломер H. polymorpha 76
4.2.3. Получение штаммов, экспрессирующих мутантные формы HpTER 77
4.2.4. Саузерн блот анализ концевых рестрикционных фрагментов 78
4.2.5. Получение штаммов Rap1A-C-HA и Rap1B-HA 80
4.2.6. Получение «нокаутных» штаммов 82
4.2.7. Иммунопреципитация хроматина 83
5. Выводы 86
6. Список литературы 87
