Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Общие аспекты патогенеза сахарного диабета 10
1.1.1. Особенности протекания биохимических процессов при аллоксановом диабете 11
1.2. Физиолого-биохимические особенности печени 11
1.3. Общая схема трансформации основных запасающих веществ в животном организме 14
1.4. Биохимические аспекты процессов, ведущих к интенсификации глюконеогенеза 22
1.4.1. Трансформация липидов в гликоген у высших животных 29
1.4.2. Ультраструктурные изменения клеток животных при патологических процессах 29
1.4.3. Роль глюконеогенетических ферментов и интермедиатов в эмбриогенезе и при экспериментальном диабете 32
1.5. Роль глиоксилатного цикла в трансформации жиров в углеводы у организмов разных таксонов 35
1.5.1. Глиоксилатный цикл - определяющий этап глюконеогенеза 35
1.5.2. Распространение глиоксилатного цикла 36
1.5.2.1. Функционирование глиоксилатного цикла у микроорганизмов...36
1.5.2.1.1. Экспрессия маркерных ферментов глиоксилатного цикла у патогенных микроорганизмов 38
1.5.2.2. Функционирование глиоксилатного цикла у растений и грибов
1.5.2.3. Глиоксилатный цикл в тканях животных 43
1.5.3. Характеристика маркерных ферментов глиоксилатного цикла 47
1.5.3.1. Структура гена и белка изоцитратлиазы 48
1.5.3.2. Структура гена и белка малатсинтазы 49
1.5.4. Физико-химические характеристики изоцитратлиазы 50
1.5.5. Кинетические и регуляторные свойства изоцитратлиазы 52
1.5.6. Регуляция экспрессионной активности ключевых ферментов глиоксилатного цикла 55
1.5.7. Эволюция ферментов глиоксилатного цикла 60
Экспериментальная часть
2.1. Цель и задачи 62
2.2. Объекты и методы исследования 63
2.2.1. Объекты исследования 63
2.2.2. Методы исследования 63
2.2.2.1. Создание модели аллоксанового диабета у крыс Rattus Rattus L...63
2.2.2.2. Выращивание эмбрионов птиц Gallus domesticus L 63
2.2.2.3. Получение экстрактов различных тканей 63
2.2.2.4. Дифференциальное центрифугирование 64
2.2.2.5. Определение активности ферментов 64
2.2.2.6. Определение концентрации метаболитов углеводного обмена 65
2.2.2.7. Определение количества белка 65
2.2.2.8. Выделение и очистка ферментов 67
2.2.2.9. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония 67
2.2.2.10. Гель-фильтрация и ионообменная хроматография 68
2.2.2.11. Определение молекулярной массы фермента 68
2.2.2.12. Электрофоретические исследования белков 69
2.2.2.13. Определение массы субъединиц фермента 70
2.2.2.14. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности ферментов 70
2.2.2.15. Экстракция суммарной РНК 70
2.2.2.16. Проведение обратной транскрипции мРНК и полимсразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) 71
2.2.2.17. Определение количества РНК и ДНК 72
2.2.2.18. Анализ аминокислотных и нуклеотидных последовательностей
2.2.2.19. Аналитический электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле 73
2.2.2.20. Статистическая обработка данных 73
2.3. Полученные результаты и их обсуждение 74
2.3.1. Разработка модели экспериментального диабета 74
2.3.2. Динамика содержания основных субстратов и метаболитов в печени крыс при экспериментальном диабете и в печени эмбрионов птиц 75
2.3.3. Динамика активности ферментов основных метаболических путей в печени крыс с экспериментальным диабетом и в печени эмбрионов птиц 77
2.3.3.1. Индукция ферментов глиоксилатного цикла у крыс при
экспериментальном диабете и у птиц в ходе онтогенеза 87
2.3.4. Изучение субклеточной локализации глиоксилатного цикла в
животных тканях 89
2.3.5. Очистка изоцитратлиазы из печени крыс с аллоксановым диабетом и изучение ее свойств 94
2.3.6. Очистка и изучение свойств изоцитратлиазы из печени эмбрионов птиц 104
2.3.7. Сравнение свойств ИЦЛ из печени крыс и эмбрионов птиц 113
2.4. Характеристика экспрессии ИЦЛ в печени эмбрионов птиц и в печени
крыс, страдающих аллоксановым диабетотм 115
2.4.1. Разработка праймеров для идентификации гена изоцитратлиазы в геномах животных различных таксономических групп 119
2.4.2. Проведение ПЦР для обнаружения гена ИЦЛ в геномах животных.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 126
ВЫВОДЫ 132
ЛИТЕРАТУРА 134
