Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Введение 10
1.2. Взаимодействие M.tuberculosis с мононуклеарными фагоцитами хозяина 13
1.3. Нейтрофилы и туберкулез 17
1. 4. Воспаление при туберкулезе 22
1.4. 1. Образование гранулем 22
1. 4. 2. Регуляция воспаления 27
1. 4. 3. Цитокины семейства IL-6 28
1. 5. Заключение 31
2. Материалы и методы 33
2.1. Лабораторные животные 33
2.2. Микобактериальные культуры 33
2.3. Заражением tuberculosis H37Rv 34
2.4. Определение количества микобактерий в органах зараженных животных 35
2.5. Антигены 35
2.6. Среды и растворы 36
2.7. Получение поликлональных антител к IL-11 мыши 37
2.8. Получение суспензии клеток легкого 39
2.9. Получение суспензии клеток костного мозга 39
2.10. Получение культуры ДК 40
2.11. Нагрузка ДК антигеном 40
2.12. Иммунизация ДК 41
2.13. Анализ клеток методом проточной цитофлуориметрии 41
2.14. Определение продукции цитокинов 42
2.15. Выделение суммарной РНК из суспензии клеток 43
2.16. Получение кДНК 44
2.17. Определение продукции цитокинов и хемокинов клетками методом ПЦР в реальном времени 45
2.18. Определение продукции цитокинов и хемокинов клетками легкого методом микроэррей 45
2.19. Фракционирование и извлечение ДНК из агарозных гелей 46
2.20. Приготовление компетентных клеток Escherichia coli 46
2.21. Трансформация клеток Е. coli 47
2.22. Проверка индукции синтеза рекомбинантных белков в штамме Ml5 E.coli 48
2.23. Электрофорез белков в полиакриламидном геле 48
2.24. Определение растворимости белков 50
2.25. Получение препаративных количеств рекомбинантных белков 50
2.26. Выделение и очистка белков методом металл-хелатной хроматографии 51
2.27. Гистологические исследования 52
2.27.1. Приготовление крио-срезов 52
2.27.2. Приготовление парафиновых блоков 52
2.28. Статистическая обработка результатов 53
3. Результаты и обсуждение 54
3.1. Модулирование воспаления введением диклофенака и выращенных in vitro дендритных клеток 54
3.2. Роль IL-11 в воспалении 58
3.2.1. При туберкулезной инфекции у генетически чувствительных мышей увеличивается уровень IL-11 58
3.2.2. Блокирование IL-11 антителами 61
3.2.3. Клеточная инфильтрация и иммунный ответ в легких 64
3.2.4. Аутокринная регуляция IL-11 на уровне транскрипции 67
3.2.5. Блокировка рецептора IL-11 мутантной формой IL-11 69
3.2.5.1. Получение искусственного гена /7-77 и его мутанта 69
3.2.5.2. Изучение влияния рекомбинантного IL-11 дикого типа и его мутантной формы на течение экспериментального ТБ 73
3.3. Блокировка туберкулезного воспаления ткани легкого пептидом NBD 80
Заключение 89
Выводы 92
Список используемых сокращений 93
Литература 96
