Введение
I. Обзор литературы 7
1.1. Хромосомные транслокации, ассоциированные с онкологическими заболеваниями 7
1.1.1. Незаконная рекомбинация 7
1.1.2. История изучения механизмов незаконной рекомбинации 8
1.1.3. Хромосомные транслокации и ассоциированные с ними заболевания 9
1.1.4. Семейства химерных белков 11
1.1.5. Гены-партнеры по хромосомным транслокациям и кластеризация точек разрыва ДНК 12
1.1.6. Механизм возникновения хромосомных транслокаций 15
1.1.7. Структура кластеров точек разрыва ДНК как предпосылка для образования хромосомных транслокаций 16
1.2. Двухцепочечные разрывы ДНК и их репарация 18
1.2.1. Репарация двухцепочечных разрывов ДНК 18
1.2.1. ДНК-топоизомераза II и ее функции в клетке 21
1.2.2. Ингибирование ДНК-топоизомеразы II как причина образования двухцепочечных разрывов ДНК 23
1.2.3. Ингибирование ДНК-топоизомеразы II как предпосылка для возникновения хромосомных транслокаций 25
1.2.4. Гипотезы возникновения хромосомных транслокаций 27
CLASS 1.3. Позиционирование хромосом в ядре и вероятность возникновения хромосомных транслокаций CLASS 31
1.3.1. Хромосомные территории 31
1.3.2. Пространственная близость хромосомных территорий способствует образованию транслокаций 32
1.3.3. Перемешивание хромосомных территорий 32
1.3.4. Современная модель организации хромосомных территорий 34
1.3.5. Релокализация геномных локусов внутри ядра. Роль ядерных моторных белков в этих процессах 36
Постановка задачи и методические подходы 41
II. Материалы и методы 42
II. 1. Материалы 42
П. 1.1. Клеточные линии 42
П. 1.2. Антитела 42
П. 1.3. Химические реактивы 42
П. 1.4. Программное обеспечение 43
11.2. Методы 44
П.2.1. Культивирование клеточных линий 44
11.2.2. Электрофорез в пульсирующем поле 44
11.2.3. Определение количества мертвых клеток 44
11.2 А. Иммуноокрашивание 45
11.2.5. Флюоресцентная гибридизация in situ (FISH) 45
П.2.5.1. Приготовление двумерных препаратов фиксированных клеток 45
IL2.5.2. Выделение бакмидной ДНК из клеток E.coli 45
И.2.5.3. Синтез пробы 46
П.2.5.4. Гибридизация 46
П.2.5.5. Приготовление трехмерных препаратов клеток Jurkat 47
П.2.5.6. Гибридизация с пробой Vysis 48
11.2.6. Компьютерная обработка изображений 49
11.2.7. Статистический анализ данных 49
П.2.8. Иммунопреципитация хроматина 50
П.2.8.1. Растворы 50
П.2.8.2. Методика 50
П.2.8.3. ПЦР в реальном времени с TaqMan-пробами 51
III. Результаты исследований 53
Піл. Анализ взаимного расположения генов aml1 и ето в культуре первичных эмбриональных фибробластов человека 53
Ш.2. Ингибирование лигирующей активности днк-топоизомеразы ii вызывает перемещение гена ето в направлении центра ядра 57
Ш.з. Ингибирование днк-топоизомеразы ii вызывает релокализацию гена ето в область ядрышка 61
Ш.4. Ингибирование днк-топоизомеразы ii приводит к предпочтительному связыванию нуклеолина с bcr2 гена ето 68
Обсуждение результатов 70
Выводы 78
Список цитируемой литературы
