Введение
Глава I. Факторы трансляции и их участие в регуляции синтеза белков 10
1.1. Общая характеристика факторов инициации 10
1.2. Участие факторов инициации в сборке инициаторного комплекса 13
1.3. Роль факторов инициации в регуляции ранних этапов инициации трансляции 18
1.4. Роль факторов инициации в регуляции связывания различных клеточных мРНК преишщиаторным комплексом 23
Глава 2. Регуляция синтеза бедка в метках при инфекции 28
2.1. Подавление синтеза клеточных белков при пикорнавирусной инфекции 30
2.2. Кандидаты на роль вирус-специфического ингибитора трансляции 36
2.3. Нарушение активности кэп-связывающих белков в системах "пикорнавирус-клетка" с кинетикой угнетения синтеза белка по типу I 39
2.4. Конкуренция вирусных и клеточных мРНК в системах "пикорнавирус-клетка" с кинетикой угнетения синтеза белка по типу II 44
2.5. Ионные условия в клетке и подавление синтеза клеточных белков 47
2.6. Общее угнетение синтеза белка на поздних стадиях инфекции 48
Глава 3. Материалы и методы 51
3.1. Реактивы и биоматериалы 51
3.2. Буферные растворы 52
3.3. Пассирование клеток Кребс-2 53
3.4. Выращивание вируса ЭМК 54
3.5. Выделение белков, меченных радиоактивными аминокислотами 55
3.6. Определение радиоактивности в кислото-растворимой и кислотонерастворимой фракциях из клеток Кребс-2 56
3.7. Очистка вируса ЭМК и выделение вирионной РНК 57
3.8. Выделение цитоплазматической поли(А)-содержащей РНК из клеток Кребс-2 58
3.9. Выделение инициаторной тНЖ~ из клеток Кребс-2 60
3.10. Аминоацилирование тРНК 3Н-метионином 61
3.11. Выделение суммарных факторов инициации из клеток Кребс-2 и ретикулоцитов кролика 63
3.12. Бесклеточная белок-синтезирующая система из клеток Кребс-2 66
3.13. Анализ комплекса / 3Н-мет-тРНКф-40 S субчастица рибосомы / 67
3.14. Тестирование комплекса /3Н-мет-тРНКй« еП-2ГТФ/ на нитроцеллюлозных фильтрах 69
3.15. Электрофорез белков в ПААГ с ДСН и радиоавтография 70
Глава 4. Изучение ранних этапов инициации трансляции в клетках кребс-2, зараженных вирусом 72
4.1. Изучение образования 40 5 преинициаторного комплекса i 75
4.2. Изучение активности факторов инициации, участвующих в образовании преинициаторного комплекса 85
Глава 5. Активность факторов инициации в зараженбых клетках и влияние факторов на относительную эффективность трансляции клеточных и вирусных мРНК 92
5.1. Влияние суммарных факторов инициации из зараженных клеток на трансляцию клеточных мРНК и РНК вируса ЭМК 92
5.2. Влияние факторов инициации на трансляционную конкуренцию клеточных мРНК
и РНК вируса ЭМК 97
Выводы 128
Список цитированной литературы 130
