Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Гомеостаз глюкозы в организме 9
1.2. Глюкостатическая функция печени. 9
1.3. Глюконеогенез 10
1.4. Сигнальный каскад инсулина 13
1.5. FOXO1 18
1.6. Гомеобоксные белки TALE. 22
1.7. Транскрипционный фактор Prep1 24
2. Материалы и методы 29
2.1. Получение клеточной линии HepG2, несущей нокаут гена Prep1. 29
2.2. Мышиная линия несущая селективный нокаут Prep1 в гепатоцитах 30
2.3. Выделение первичной культуры гепатоцитов мыши 33
2.4. Измерение продукции глюкозы 35
2.5. Электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле 37
2.6. Электрофорез по Лэммли 37
2.7. Вестерн блоттинг. 38
2.8. Иммунохимическое окрашивание нитроцеллюлозных мембран после Вестерн-блоттинга 38
2.9. Получение и иммуногистохимическое окрашивание срезов печени. 39
2.10. Иммунофлуоресцентное окрашивание препаратов первичной культуры гепатоцитов 40
2.11. Анализ уровня экспрессии генов методом обратной транскрипции, совмещенной с ПЦР в реальном времени 41
2.12. Статистический анализ результатов. 43
3. Результаты и их обсуждение 44
3.1. Получение и анализ клеточных линий HepG2, содержащих нокаут Prep1 44
3.2. Prep1 не влияет на инсулиновый сигнальный каскад в клетках печени 45
3.3. Prep1 снижает влияние инсулина на глюконеогенез в гепатоцитах 50
3.4. Prep1 вовлечен в регуляцию экспрессии генов белков глюконеогенеза в печени 53
3.5. Prep1 регулирует ядерную локализацию транскрипционного фактора FOXO1 56
3.6. Prep1 регулирует активность сигнального каскада Wnt/бета-катенина 61
4. Заключение. 65
5. Выводы 67
6. Список литературы 68
