Введение
Глава 1. Обзор литературы 17
1.1. Клеточный материал, применяемый в саногенетической терапии и регенеративной медицине 17
1.1.1. Проблемные вопросы клеточных трансплантаций 27
1.2. Современные аспекты тканевой инженерии .28
1.2.1. Основные принципы построения тканеинженерных конструкций 28
1.2.2. Основные типы биоматериалов, применяемых для внеклеточного матрикса, в тканевой инженерии 36
1.2.3. Методы изготовления межклеточных матриксов 47
1.2.4. Конструктивное разнообразие тканеинженерных конструкций 49
1.2.5. Преимущества и недостатки современных тканеинженерных материалов 52
1.3. Биомедицинские материалы – сплавы на основе никелида титана 55
1.3.1. Структура и свойства пористого никелида титана 59
1.4. Заключение к обзору литературы. 68
Глава 2. Материал и методы 70
2.1. Материал исследования 70
2.2. Клеточные линии 74
2.3. Характеристика медицинских пористо–проницаемых материалов из сплавов на основе никелида титана, использованных для изготовления внеклеточных матриксов 74
2.4. Дизайн исследования .77
2.5. Технология имплантации клеток, иммобилизованных на внеклеточном матриксе из никелида титана 80
2.6. Методы определения биосовместимости внеклеточного матрикса из никелида титана. 81
2.7. Культуральные методы исследования 84
2.8. Биохимические методы исследования 85
2.9. Гистохимические окраски 85
2.10. Моделирование злокачественного опухолевого роста 86
2.11. Методы оценки эффективности саногенетических воздействий, при злокачественном росте 87
2.12. Создание печеночной тканеинженерной конструкции 94
2.13. Комбинированное введение клеток печени и стромальных клеток костного мозга на внеклеточном матриксе из никелида титана .96
2.14. Создание тканеинженерной конструкции поджелудочной железы .98
2.15. Сочетанное введение клеток поджелудочной железы и стромальных клеток костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 99
2.16. Сканирующая электронная микроскопия 100
2.17. Методы статистической обработки .100
2.18. Биоэтические аспекты исследования 101
Глава 3. Результаты собственных исследований 102
3.1. Параметры биосовместимости внеклеточных матриксов из никелида титана и модуляция ими клеточной жизнеспособности 102
3.1.1. Физико–технические параметры внеклеточных матриксов из никелида титана 102
3.1.2. Результаты испытаний биологической совместимости внеклеточных матриксов из никелида титана .104
3.1.2.1. Изменение клеточной биосовместимости при модификации поверхности образцов внеклеточного матрикса из никелида титана 105
3.1.2.2. Влияние модифицированной поверхности и архитектоники образцов внеклеточного матрикса из никелида титана на гемолитическую способность эритроцитов и цитотоксичность с фибробластами 111
3.1.3. Характеристика клеточной интеграции в зависимости от размеров и архитектоники образцов внеклеточного матрикса из никелида титана 115
3.1.4. Модуляция активности клеточных популяций на внеклеточных матриксах из никелида титана при воздействии светодиодного излучения 122
3.2. Тканеинженерные конструкции с использованием стромальных клеток костного мозга и внеклеточного матрикса из никелида титана 127
3.2.1. Основные аспекты трансплантации тканеинженерных конструкций из никелида титана .127
3.2.2. Цитотоксическая активность внеклеточных матриксов из никелида титана с различной средней пористостью со стромальными клетками костного мозга 130
3.2.3. Дифференцировка стромальных клеток костного мозга на внеклеточном матриксе из никелида титана .132
3.2.4. Развитие стромальных клеток костного мозга во внеклеточных матриксах из никелида титана 138
3.2.5. Противоопухолевое и антиметастатическое действие клеток аллогенного костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана. 142
3.2.5.1. Противоопухолевое действие клеток аллогенного костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 142
3.2.5.2. Влияние трансплантации клеток аллогенного костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана на морфофизиологические параметры иммунокомпетентных органов. .147
3.2.5.3. Трансплантация клеток аллогенного костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана и адаптационные реакции организма 153
3.2.5.4. Влияние аллогенных клеток костного мозга на внеклеточном матриксе из никелида титана на неспецифические факторы иммунитета при опухолевом росте .155
3.2.5.5. Пролиферативный ответ спленоцитов на митогены после трансплантации аллогенных клеток костного мозга 159
3.2.5.6. Cубпопуляционный состав лимфоцитов селезенки после трансплантации аллогенных клеток костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 162
3.3. Трансплантация клеток печени на внеклеточных матриксах из никелида титана .165
3.3.1. Тестирование биосовместимости клеток печени с внеклеточными матриксами из никелида титана 165
3.3.2. Исследование развития клеток печени во внеклеточных матриксах методом электронной микроскопии 169
3.3.3. Саногенетическое действие тканеинженерных конструкций на основе внеклеточного матрикса из никелида титана с иммобилизованными клетками печени при экспериментальном CCl4–индуцированном гепатите .172
3.3.4. Сочетанное введение клеток печени совместно со стромальными клетками костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 185
3.3.4.1. Выявление оптимального соотношения клеток печени и стромальных клеток костного мозга при культивировании и получении эффективного терапевтического ответа 185
3.3.4.2. Саногенетическая эффективность сочетанной трансплантации клеток печени и стромальных клеток костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 189
3.3.4.3. Исследование гематологических показателей после сочетанного введения клеток печени и стромальных клеток костного мозга на фоне ССl4–индуцированного гепатита 197
3.4. Тканеинженерные конструкции на основе клеток поджелудочной железы, иммобилизованных на внеклеточных матриксах из никелида титана 202
3.4.1. Методология культивирования и имплантации клеток поджелудочной железы на внеклеточных матриксах из никелида титана 202
3.4.2. Развитие клеток поджелудочной железы в поровой структуре внеклеточного матрикса из никелида титана in vivo 205
3.4.3. Саногенетическое действие тканеинженерных конструкций на основе внеклеточного матрикса из никелида титана с клетками поджелудочной железы у экспериментальных животных с аллоксановым диабетом 208
3.4.4. Показатели периферической крови и костного мозга после трансплантации клеток поджелудочной железы на внеклеточном матриксе из никелида титана при аллоксаниндуцированном диабете 215
3.4.5. Сочетанное введение клеток поджелудочной железы со стромальными клетками костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 222
3.4.5.1. Выявление оптимального соотношения клеток поджелудочной железы и стромальных клеток костного мозга при совместном культивировании и получении эффективного терапевтического ответа 222
3.4.5.2. Саногенетическая эффективность сочетанного введения клеток поджелудочной железы и стромальных клеток костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана 226
3.4.5.3. Изменение гематологических параметров после сочетанного введения клеток поджелудочной железы и стромальных клеток костного мозга на внеклеточных матриксах из никелида титана .230
Заключение. 235
Выводы 253
Список сокращений 255
Список литературы. 256
Приложения 295
