Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Общая характеристика оспы овец и коз 11
1.1.1. Распространенность заболеваний 11
1.1.2. Клиническая картина заболеваний 14
1.1.3. Патологоанатомические изменения 15
1.1.4. Эпизоотологические особенности 16
1.2. Характеристика BOO и ВОК 17
1.2.1. Таксономическое положение 17
1.2.2. Видовая специфичность 18
1.2.3. Физико-химические свойства 20
1.2.4. Структура вириона 20
1.3. Геном BOO и ВОК 25
1.4. Патогенез BOO и ВОК 27
1.4.1. Проникновение вируса в клетку 27
1.4.2. Депротеинизация вирусной сердцевины 29
1.4.3. Экспрессия генов 30
1.4.4. Морфогенез 31
1.5. Культивирование BOO и ВОК 32
1.6. Иммунитет и специфическая профилактика 33
1.7. Диагностика оспы овец и оспы коз 37
1.7.1. Дифференциальная диагностика 37
1.7.2. Вирусологические методы диагностики 38
1.7.3. Серологические методы 40
1.7.4. Молекулярно-биологические методы 48
1.8. Заключение по обзору литературы 51
2. Собственные исследования 54
2.1. Материалы 54
2.1.1. Патологический материал 54
2.1.2. Вирусы 54
2.1.3. Реактивы и ферменты 54
2.1.4. Праймеры 55
2.1.5. Растворы и буферные смеси 55
2.1.6. Оборудование 55
2.2. Методы 56
2.2.1. Расчет праимеров для ПЦР 56
2.2.2. Выделение ДНК 57
2.2.3. Полимеразная цепная реакция 57
2.2.4. Очистка продуктов ПЦР 58
2.2.5. Рестрикционный анализ 58
2.2.6. Молекулярное клонирование 59
2.2.7. Экспрессия рекомбинантных белков 59
2.2.8. Сыворотки крови 59
2.2.9. Иммуноферментный анализ 60
3. Резульаты собственных исследований 62
3.1. Расчет праимеров для метода индикации и видовой дифференциации каприпоксвирусов 62
3.2. Оценка специфичности метода видовой дифференциации каприпоксвирусов 64
3.3. Оценка аналитической чувствительности метода видовой дифференциации каприпоксвирусов 67
3.4. Разработка метода дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец 69
3.5. Оценка специфичности метода штаммовой дифференциации BOO.. 71
3.6. Разработка метода обнаружения вируса контагиозной эктимы на основе ПЦР 74
3.7. Получение рекомбинантных антигенов BOO 76
3.8. Оценка активности рекомбинантных антигенов 79
3.9. Разработка непрямого варианта ИФА на основе рекомбинантных антигенов Р17иР18 81
3.9.1. Определение рабочего разведения антигенов Р17иР18 81
3.9.2. Выбор блокирующего раствора 83
3.9.3. Выбор буфера для приготовления блокирующего раствора 87
3.9.4. Выбор рабочего разведения конъюгата 88
3.9.5. Определение позитивно-негативного порога для Р17-ИФАиР18-ИФА 89
3.9.6. Оценка воспроизводимости методов Р17-ИФА и Р18-ИФА 91
3.10. Определение диагностической чувствительности и специфичности ИФА на основе рекомбинантных антигенов Р18иР17 92
4. Обсуждение результатов исследования 95
5. Выводы 108
6. Практические предложения 109
7. Список литературы 110
Приложения 128
