Введение
1. Обзор литературы 11
1.1. Классификация рецепторов ГАМК в ЦНС млекопитающих 11
1.2. Структурная гетерогенность ГАМКд рецепторов в ЦНС млекопитающих. 15
1.2.1. Репертуар субъединиц, входящих в состав ГАМКд рецепторов 15
1.2.2. Количество субъединиц, входящих в состав одного ГАМКд рецептора 20
1.2.3. Субъединичная композиция нативных рецепторов 22
1.3. Функциональная гетерогенность нативных ГАМКд рецепторов 25
1.3.1. Функциональные свойства нативных рецепторов 26
1.3.2. Влияние аллостерических модуляторов на ГАМКд рецепторы 31
1.3.3. Структурные детерминанты эффекторных сайтов модуляторов 35
1.4. Функциональная роль гетерогенности ГАМКд рецепторов 37
2. Материалы и методы 41
2.1. Приготовление срезов 41
2.2. Конструкция инкубационной камеры 43
2.3. Конструкция регистрационной камеры 44
2.4. Выделение клеток методом вибродиссоциации 44
2.5. Изготовление микроэлектродов 46
2.6. Идентификация клеток 47
2.7. Рабочая установка для регистрации токов от изолированных нейронов 48
2.8. Порядок проведения опытов 50
2.9. Система быстрой аппликации растворов 51
2.10. Обработка данных и математическое моделирование 54
2.11. Приготовление растворов веществ 57
3 Результаты
3.1. Исследование эффектов, вызываемых ГАМК в клетках Пуркинье (КП) и гигантских интернейронах стриатума (ГИС) 59
3.1.1. Общая характеристика токов вызываемых ГАМК в КП и ГИС 59
3.1.2. Концентрационная зависимость эффектов, вызываемых ГАМК в КП и ГИС. 61
3.1.3. Сравнение абсолютных амплитуд ответов, вызываемых концентрациями ГАМК ЕС20 в КП и ГИС 63
3.1.4. Измерение относительной амплитуды ответов, вызываемых: 2мкМ ГАМК для КП и 15мкМ для ГИС 65
3.1.5. Сопоставление временных характеристик ответов КП и ГИС, вызванных аппликацией ГАМК ЕСго 67
3.2. Исследование действия фуросемида на токи, вызываемые ГАМК 69
3.2.1. Влияние фуросемида на токи, вызванные ГАМК в КП и ГИС 69
3.2.2. Изменения ответов на ГАМК при совместной аппликации с фуросемидом. 69
3.2.3. Влияние фуросемида на скорость активации ответа в КП и ГИС 71
3.2.4. Влияние фуросемида на амплитуду стационрного ответа вызванного ГАМК в КПиГИС 72
3.2.4.1. Концентрационная зависимость эффектов фуросемида 72
3.2.4.2. Зависимость эффектов фуросемида проявляемых от мембранного потенциала 74
3.2.5. Эффекты фуросемида на стадии деактивации ответа в КП и ГИС. 77
3.2.6. Влияние постоянного присутвия фуросемида на токи, вызываемые совместной аппликацией ГАМК и фуросеимда 81
3.2.7. Влияние фуросемида на чувствительность ГАМКд рецепторов к ГАМК в КП 82
3.2.8. Моделирование 84
3.3. Изучение модулирующего воздействия зольпидема на токи вызываемые ГАМК в КПиГИС 93
3.4. Изучение модулирующего действия лореклезола на токи, вызываемые ГАМК в КП и ГИС 96
3.5. Модуляция LaCb токов вызываемых ГАМК 100
3.5.1. Общие замечания относительно действия LaCb 100
3.5.2. Исследование концентрационной зависимости эффектов LaCb в КП и ГИСЛОО
3.5.3. Зависимость эффектов LaCb от коапплицируемой концентрации ГАМК 102
3.5.4. Влияние преаппликации ЬаСІз на токи вызываемые совместной аппликацией. 102
3.5.5. Влияние лантана на чувствительность ГАМКдрецеторов к ГАМК в КП и ГИС. 104
3.5.5.1. Влияние ЬаСІз на чувствительность КПк ГАМК 105
3.5.5.2. Влияние LaCb на чувствительность ГИС к ГАМК 105
3.5.6. Влияние мембранного потенциала клеток на эффекты вызываемые LaCb 108
4. Обсуждение 111
4.1. Выбор объектов и методики исследования 111
4.1.1. Выбор объектов исследования 111
4.1.2. Использование селективных модуляторов для изучения функциональных свойств ГАМКд рецепторов 112
4.1.3. Идентификация токов, вызываемых активацией ГАМКд рецепторов 114
4.1.4. Идентификация выделенных нейронов 116
4.2. Эффекты, вызываемые ГАМК в КП и ГИС 117
4.2.1. Концентрационная зависимость эффектов ГАМК 117
4.2.2. Сравнение относительных амплитуд ответов, вызванных аппликацией ГАМК ЕС20 120
4.2.3. Сравнение абсолютных величин ответов, вызываемых аппликацией ГАМК ЕС20 121
4.2.4. Сравнение временных характеристик ответов на ГАМК ЕС20 122
4.3.Модулирующее действие фуросемида 123
4.3.1. Характерные черты модуляции фуросемидом токов, вызванных ГАМК в КП и ГИС 123
4.3.2. Моделирование 129
4.3.2.1. Обсуждение модели блокирующего действия фуросемида 129
4.3.2.2. Выбор модели активации ГАМКд рецепторов КП 132
4.3.2.3. Сопоставление результатов моделирования с экспериментальными данными 133
4.4. Модулирующее действие зольпидема, LaCI3, и лореклезола на токи, вызываемые ГАМК 135
4.4.1. Общая характеристика 135
4.4.2. Модулирующее действие зольпидема на токи, вызываемые ГАМК 135
4.4.3. Модуляция ГАМК вызванных токов лореклезолом 137
4.4.4. Модулирующее действие лантана 140
4.5. Сопоставление функциональных свойств рецепторов с данными о распределении субъединиц 142
Выводы 146
