Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1 Механизмы ЭМП 17
1.1.1 Внеклеточные сигналы-индукторы ЭМП 17
1.1.2 Транскрипционные факторы 20
1.1.3 МикроРНК 23
1.1.4 Альтернативный сплайсинг 24
1.1.5 Разрушение межклеточных контактов и нарушение полярности 25
1.1.6 Аутофагия 31
1.2 Эпителио-мезенхимные переходы в патогенезе фиброза 33
1.2.1 Фиброз почек 35
1.2.2 Идиопатический легочный фиброз 37
1.2.3 Фиброз печени 39
1.2.4 Келоидные рубцы 40
1.2.5 Фиброзные изменения в сетчатке глаза 42
1.2.6 Слизистая ротовой полости 43
1.2.7 Диагностика и терапия фиброза 44
1.3 ЭМП/МЭП в репрограммировании соматических клеток in vitro 46
1.4 ЭМП и 3D культивирование 49
Глава 2. Материалы и методы 53
2.1 Культивирование клеток 53
2.1.1 2D культуры 53
2.1.2 3D культуры 56
2.1.3 Вторичноприкрепленные культуры 56
2.2 Прижизненная цейтраферная (time-lapse) микроскопия 57
2.3 Математическое моделирование 58
2.4 Гистология и электронная микроскопия 61
2.4.1 Фиксация образцов 61
2.4.2 Гистология – полутонкие срезы 62
2.4.3 Просвечивающая электронная микроскопия 62
2.4.4 Растровая электронная микроскопия 63
2.5 Проточная цитофлуориметрия 63
2.6 Иммуноцитохимия и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия 64
2.7 Репарация 3D культуры ретинального пигментного эпителия после повреждения наносекундным лазерным скальпелем 65
Глава 3. Результаты 66
3.1 Монослойные культуры 66
3.1.1 Буккальный эпителий 66
3.1.2 Ретинальный пигментный эпителий 73
3.1.3 Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки лимба 78
3.1.4 Фибробласты собственной пластинки слизистой щеки 83
3.1.5 Сравнение миграционной активности клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов повреждения монослоя в 2D культуре в тесте «заживление царапины» 86
3.2 Математическое моделирование для определения оптимальных параметров 3D культивирования клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов 89
3.2.1 Моделирование процесса сфероидогенеза из клеток эпителиального фенотипа 90
3.2.2 Моделирование процесса сфероидогенеза из клеток мезенхимного фенотипа 96
3.2.3 Сравнение результатов моделирования процесса компактизации для сфероидов из клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов 104
3.3 3D Культивирование 107
3.3.1 Буккальный эпителий 107
3.3.2 Ретинальный пигментный эпителий 112
3.3.3 Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки лимба 118
3.3.4 Фибробласты собственной пластинки слизистой щеки 123
3.4 Анализ пролиферативной активности клеток в 3D культуре 124
3.5 Вторичноприкрепленные культуры 126
3.6 Репарация 3D культур РПЭ после повреждения наносекундным лазерным скальпелем 130
Глава 4. Обсуждение 134
Заключение 149
Выводы 152
Список использованной литературы 154
