Введение
1 Обзор литературы 11
1.1 Стрептококки группы В 11
1.1.1 Заболевания, вызванные стрептококками группы В 11
1.1.2 Факторы патогенности стрептококков группы В 13
1.2 Мобильные генетические элементы 19
1.2.1 Виды мобильных генетических элементов и способы их передачи 19
1.2.2 Мобильные генетические элементы стрептококков группы В 23
1.3 Острова патогенности 25
1.3.1 Общая характеристика островов патогенности 25
1.3.2 Острова патогенности стрептококков группы В 29
1.4 Заключение по обзору литературы 32
2 Материалы и методы 35
2.1 Материалы исследования 35
2.1.1 Характеристика используемых материалов 35
2.1.2 Оборудование 36
2.1.3 Объекты исследования 37
2.2 Методы исследования 38
2.2.1 Компьютерный анализ 38
2.2.Выделение геномной ДНК фенол-хлороформным методом 38
2.2.3 Выделение геномной ДНК набором ДНК-экспресс 39
2.2.4 Полимеразная цепная реакция 39
2.2.5 Мультиплексная полимеразная цепная реакция 43
2.2.6 Масс-спектрометрия штаммов стрептококков группы В 44
2.2.7 Рестрикция ДНК 45
2.2.8 Лигирование ДНК 45
2.2.9 Трансформация кишечной палочки
2.2.10 Схема создания слитой конструкции 46
2.2.11 Секвенирование 46
3 Результаты исследования 48
3.1 Определение серотипов СГВ с помощью мультиплексной ПЦР 48
3.2 Молекулярно-генетическая организация и распространенность острова патогенности XII з
3.3 Статистическая обработка результатов ПЦР с штаммами на гены острова патогенности, ассоциированного с геном sspBl 59
3.4 Масс-спектрометрический анализ штаммов стрептококков группы В 61
3.5 Создание рекомбинантных конструкций для экспрессии и инактивации гена sspBl 63
3.6 Сравнительный анализ белков SspBl и SspBla с гомологичными белками других микроорганизмов 69
3.7 Определение распространенности гена sspBla 71
3.8 Определение области интеграции острова патогенности, ассоциированного с геном sspBl 72
3.9 Сравнительный анализ острова патогенности, ассоциированного с геном sspBl, с островом патогенности, ассоциированным с геном sspBla 83
3.10 Анализ штаммов из Португалии и Анголы на наличие генов, ассоциированных с геном sspBla 85
4 Обсуждение 88
Заключение 95
Выводы 97
Список сокращений 98
Список литературы
