Введение
ГЛАВА 1. Клетки иммунной системы, их роль в регуляции иммуноло гических реакций ... 13
1.1. Функциональные особенности клеток иммунной системы 13
1.2. Основные рецепторы на поверхности иммуноцитов 21
1.3. Общая характеристика цитокинов. Роль фактора некроза опухоли в иммунологических реакциях 27
1.4. УФ-индуцированные изменения структурного и функционального состояния иммуноцитов 33
ГЛАВА 2. Система комплемента: особенности строения, функционирования и регуляции активности С4 компонента 38
ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования 47
3.1.Объекты исследования 47
3.2. Методы исследования 47
3.2.1. Выделение лимфоцитов из крови человека 47
3.2.2. Получение Т-лимфоцитов 48
3.2.3. Выделение макрофагов из перитонеальной жидкости мыши 48
3.2.4. Получение супернатанта иммуноцитов 48
3.2.5. Выделение нейтрофилов из крови человека 49
3.2.6. Получение сыворотки крови 50
3.2.7. УФ-облучение исследуемых образцов 50
3.2.8. Инкубация макрофагов с фактором некроза опухоли а 51
3.2.9. Метод иммуноферментного анализа для изучения процессов взаимодействия С4 фактора комплемента с мембранами иммуноцитов 51
3.2.10. Метод иммунофлуоресценции для изучения структурных свойств мембран иммуноцитов . 53
3.2.11. Определение функциональной активности С4 фактора системы комплемента методом гемолитического титрования 54
3.2.12. Регистрация и анализ ИК-спектров белка С4 55
3.2.13. Регистрация электронных спектров поглощения белка С4 57
3.2.14. Проведение диск-электрофореза в полиакриламидном гелебелка С4 57
3.2.15. Измерение буферной емкости и снятие кривых титрованиябелка С4 58
3.2.16. Получение лимфоцитарных и макрофагальных лизатовдля определения концентрации фактора некроза опухоли а и цитоток сической активности макрофагов 60
3.2.17. Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах Т-лимфоцитов 61
3.2.18. Измерение интенсивности люминолзависимой хемилюминесценции иммуноцитов 62
3.2.19. Метод определения ТБК-активных продуктов в суспензии лимфоцитов 63
3.2.20. Определение пероксидазной активности лимфоцитов 66
3.2.21. Определение супероксиддисмутазной активности лимфоцитов методом люминолзависимой хемилюминесценции 67
3.2.22. Определение цитотоксической активности макрофагов 68
3.2.23. Определение жизнеспособности макрофагов с помощью трипа-нового голубого 69
3.2.24. Статистическая обработка результатов экспериментов 69
ГЛАВА 4. Влияние УФ-света на процесс взаимодействия С4 фактора системы комплемента с мембранами иммуноцитов 70
4.1. Взаимодействие С4 фактора системы комплемента с мембранами лимфоцитов и макрофагов в условиях УФО 70
4.1.1. Влияние УФ-света на функциональное состояние мембраносвя-занногоС4 72
4.1.2. Влияние УФ-света на структурное состояние CR1 -рецепторов с лигандированным С4 на поверхности лимфоцитов и макрофагов 76
4.1.3. Взаимодействие фотомодифицированных иммуноцитов с сывороточным С4 80
4.1.4. Влияние УФ-света на гемолитическую активность белка С4 S7
4.1 .5. Влияние УФ-света на сгруктурно-функциональное состояние сывороточного С4 89
4.2. Взаимодействие С4 компонента комплемента с мембранами нейтрофилов крови человека в условиях УФО 99
4.3. Определение роли фотомодификаций белка С4 и мембран имму-ноцитов в изменение антителосвязывающей способности изучаемых систем 105
ГЛАВА 5. Анализ УФ-ішдуцировашшх структурных модификаций С4 белка системы комплемента 107
5.1. Влияние УФ-света на ИК-спектральные характеристики С4 белка системы комплемента 107
5.2. Электронные спектры поглощения УФ-облученных растворов С4 109
5.3. Электрофоретические характеристики фотомодифипированного белка С4 110
5.4. Влияние УФ-света на буферную емкость растворов белка С4 114
ГЛАВА 6. Влияние УФ-света на некоторые функциональные свойства лимфоцитов крови человека 121
6.1. Уровень продукции фактора некроза опухоли а Т-лимфоцитами в условиях УФ-облучения 121
6.2. Изучение процессов ПФОЛ, протекающих на мембранах лимфоцитов 124
6.2.1. Влияние УФ-света на хемилюминесцентные свойства лимфоцитов 125
6.2.2. Дозовая зависимость накопления ТБК-активных продуктов в суспензии лимфоцитов в условиях УФ-облучения 131
6.3. Влияние УФ-света на ферментанивную активность лимфоци тов 133
6.3Л. Влияние УФ-света на пероксидазную активность лимфоцитов134
4 6.3.2. Влияние УФ-света на супероксиддисмутазную активность лим фоцитов 140
ГЛАВА 7. Исследование сочетанного действия УФ-света и фактора некроза опухоли а на функциональную активность макрофагов 143
7.1. Изменение цитотоксической активности макрофагов в условиях УФ-облучения 143
7.2. Исследование сочетанного действия УФ-света и ФНОа на уровень спонтанной хемилюминесценции макрофагов 147
7.3. Исследование уровня жизнеспособности УФ- и цитокинмоди-фицированных макрофагов с помощью красителя трипанового голубого.. 148
7.4. Влияние сочетанного действия УФ-света и ФНОа на фагоцитарную активность макрофагов 150
7.5. Влияние сочетанного действия УФ-света и фактора некроза опухоли на состояние CR1 -рецепторов с лигандированным С4 на поверхности макрофагов 162
7.6. Изучение сочетанного действия УФ-света и ФНОа на супероксид-дисмутазную активность макрофагов 167
7.7. О процессах, ответственных за изменение функциональной активности фото- и цитокинмодифицированньгх макрофагов 169
Заключение 172
Выводы 179
Список литературы 182
Приложение 208
