Введение
Часть 1. Обзор литературы 9
Глава 1. Фенотипические особенности субпопуляций В-лимфоцитов различной локализации в организме 9
1.1. Фенотип В-1 лимфоцитов 11
1.2. В-1 лимфоциты и IL-10 16
Глава 2. Регуляторные В-клетки 20
2.1. Фенотипическая характеристика регуляторных В-клеток (Вreg) 20
2.2. Происхождение Вreg 22
2.3. Роль поверхностных молекул в деятельности Вreg 24
2.4. Экспериментальные модели в изучении регуляторных В-клеток 30
2.5. Взаимосвязь и взаимодействие Вreg и Treg 41
Глава 3. Клеточные взаимодействия при иммунном ответе 45
3.1. Взаимодействие В и Т-лимфоцитов 45
3.2. Роль макрофагов при иммунном ответе В-лимфоцитов 49
3.3. Влияние стромальных клеток на ответ В-лимфоцитов 51
Часть 2. Экспериментальные исследования 54
Глава 4. Материалы и методы исследования 54
4.1. Животные и материалы 54
4.2. Методы 55
4.2.1. Приготовление клеточных суспензий 55
4.2.2. Постановка реакции цитотоксичности 55
4.2.3. Выделение субпопуляций лимфоцитов 56
4.2.4. Получение дендритных клеток (ДК) 62
4.2.5. Культивирование клеток in vitro 62
4.2.6. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 63
4.2.7. Клеточный иммуноферментный анализ (ELISPOT) 64
4.2.8. Витальное окрашивание клеток CFDA-SE 65
4.2.9. Проточная цитометрия 66
4.2.10. Адоптивный перенос Breg мышей линии СВА мышам линии CBA/N 67
4.2.11 Статистическая обработка результатов 67
Глава 5. Результаты исследований 68
5.1. Разработка модельной системы для изучения межклеточных взаимодействий с использованием конгенных линий мышей СВА и СВА/N in vitro при ответе на ТН-2 АГ 68
5.1.1. Определение функциональной активности перитонельных и селезеночных клеток мышей линии СВА в смешанных культурах со спленоцитами мышей линии СВА/N 68
5.1.2.Определение клеточного состава смешанных культур до и после культивирования in vitro 71
5.1.3.Оценка функциональной активности выделенных В-1 и В-2 лимфоцитов мышей СВА в смешанных культурах при ответе на ТН-2 антигены 74
5.2. Изучение взаимодействий В-1, В-2, Т лимфоцитов и ДК при индукции иммунного ответа на ТН-2 АГ in vitro 78
5.2.1. Влияние ДК на жизнеспособность В-клеток 78
5.2.2. Влияние ДК на иммунный ответ В-1 и В-2 лимфоцитов на ТН-2 АГ в модельной системе 79
5.2.3. Влияние Т-клеток на иммунный ответ В-1 и В-2 лимфоцитов на ТН-2 АГ 81
5.2.4. Влияние ДК на иммунный ответ В-1 и В-2 лимфоцитов в присутствии Т-клеток 83
5.3. Роль Вreg клеток в гуморальном иммунном ответе 85
5.3.1. Изучение влияния IL-10 на иммунный ответ В-1 клеток мышей СВА и В-2 клеток мышей СВА и CBA/N на ТЗ и ТН-АГ в модельной системе in vitro 86
5.3.2. Фенотип и функциональная активность Вreg 89
5.3.3. Определение влияния Breg на иммунный ответ in vitro 92
5.3.4. Влияние Breg на иммунный ответ in vivo 96
Глава 6. Обсуждение результатов 98
Выводы 112
Благодарности 113
Список сокращений 114
Список литературы 116
