Введение
Обзор литературы 7
Вирус простого герпеса первого типа: общая характеристика, жизненный цикл и репликация 7
Общая характеристика семейства Herpesviridae 7
Структура вириона ВПГ-1 10
Структура генома ВПГ-1 13
Жизненный цикл, экспрессия генов и репликация ВПГ-1 13
ДНК-полимераза ВПГ-1 20
Ингибиторы репликации вируса герпеса: клинические препараты и лабораторные разработки 22
Клинически одобренные антигерпетические препараты 22
Поиск новых антигерпетических препаратов 27
Материалы и методы 34
Клеточные культуры 34
Приготовление компетентных клеток Е. coli 35
Трансформация бактериальных клеток 35
Манипуляции сплазмидной ДНК 35
Выделение геномной ДНК 36
Полимеразная цепная реакция 36
Конструирование плазмид 36
Молекулярно-генетический анализ нуклеотидных последовательностей 39
Получение лабораторных клонов ВПГ-1 устойчивых к ACV (L2/R) и HpACV (1-7) .39
Экспрессия белка в клетках Е coli 40
Работа с клетками НЕК293Т 40
Трансфекция клеток НЕК293Т 40
Детекция целевой мРНК 40
Получение рекомбинантной бакмиды 41
Работа с клетками 5/9 41
Получение вирусных стоков 41
Экспрессия белка в клетках S/9 42
Очистка белка 42
Ингибирование реакции элонгации, катализируемой ДНК-полимеразой ВПГ или ОТ ВИЧ 42
Субстратная специфичность ДНК-полимеразы ВПГ 43
Субстратная специфичность ОТ ВИЧ 43
Результаты и обсуждение 43
Молекулярно-генетический анализ ДНК-полимераз и тимидинкиназ из клинических и лабораторных изолятов ВПГ-1 44
Филогенетический анализ 46
Чувствительность штаммов к антигерпетическим агентам 46
Мутации в тимидинкиназе 49
Мутации в ДНК-полимеразе 52 Экспрессия и выделение ДНК полимеразы ВПГ 59
Экспрессия ДНК-полимеразы ВПГ в прокариотических системах 60
Экспрессия и выделение ДНК-полимеразы ВПГ в бакуловируснои системе 61
Поиск новых антигерпетических препаратов 67
Антигерпетическая активность фосфонатных аналогов нуклеозидов 67
Ингибирование ДНК-полимеразы ВПГ 2Т-нуклеотидами 70
Антигерпетическая активность производных триазинов 72
Выводы 76
Список литературы 77
