Введение
ГЛАВА 1. Определение локального риска заражения в природном очаге клещевого энцефалита 14
1.1. Понятие природного очага инфекции 14
1.2. Понятие риска заражения в природном очаге инфекции 16
ГЛАВА 2. Особенности биологии и экологии иксодовых клещей 18
2.1. Систематическое положение и общая характеристика иксодовых клещей 18
2.2. Циклы развития клещей I. ricinus и I. persulcatus 20
2.3. Поведение иксодовых клещей 28
2.4. Иксодовые клещи как переносчики ВКЭ 35
ГЛАВА 3. Вирус клещевого энцефалита 42
3.1. Общая характеристика флавивирусов 42
3.2. Экология вируса клещевого энцефалита 50
3.3. Адаптации вируса клещевого энцефалита к репликации в переносчике и хозяине 53
Материалы и методы 67
ГЛАВА 1. Вирусы, клетки и животные, использованные в работе 67
1.1. Клетки 67
1.2. Вирусы 68
1.3. Животные 68
1.4. Титрование вируса методом бляшек в культуре клеток СПЭВ 68
1.5. Титрование ВКЭ на мышах 68
1.6. Динамика размножения ВКЭ в культуре клеток СПЭВ и линиях клеток клещей 69
ГЛАВА 2. Сбор, содержание и заражение иксодовых клещей 71
2.1. Сбор клещей в природе 71
2.2. Культивирование клещей в лабораторных условиях 73
2.3. Определение физиологического возраста самок иксодовых клещей 75
2.4. Определение репеллентной активности ДЭТА в отношении иксодовых клещей 77
2.5. Определение реакции иксодовых клещей на запахи растений 78
2.6. Методы заражения клещей вирусом клещевого энцефалита 81
2.7. Размножение ВКЭ в заражённых клещах I. ricinus при питании и разной температуре
окружающей среды 83
2.8. Проведение пассажей ВКЭ в клещах разных видов 84
2.9. Персистентная инфекция ВКЭ клещей разных видов 84
ГЛАВА 3. Молекулярные и серологические методы 86
3.1. Получение клещевых суспензий 86
3.2. Анализ клещевых суспензий на наличие антигена ВКЭ методом ИФА 86
3.3. Анализ клещевых суспензий на наличие РНК ВКЭ методом ПЦР в реальном времени 86
3.4. Проведение слепого эксперимента 87
3.5. Олигонуклеотиды 87
3.6. Выделение РНК 88
3.7. Обратная транскрипция 88
3.8. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 88
3.9. Аналитический электрофорез в агарозном геле. 3.10. Препаративный электрофорез и выделение продукта ПЦР из легкоплавкой агарозы... 89
3.11. Определение нуклеотидной последовательности ДНК 89
3.12. Статистическая обработка з
Результаты и обсуждение 91
Глава 1. Методы заражения иксодовых клещей ВКЭ 91
1.1. Травматичность методов 92
1.2. Динамика размножения ВКЭ в половозрелых клещах, зараженных разными методами 92
1.3. Эффективность заражения 95
1.4. Обсуждение 98
Глава 2. Исследование эффективности детекции вкэ в иксодовых клещах различными методами 101
2.1. Приготовление материала для исследования 101
2.2. Результаты анализа клещей 104
2.3. Обсуждение 109
ГЛАВА 3. Неоднородность обилия и зараженности вкэ иксодовых клещей на примере иксодофауны республики карелия 111
3.1. Видовой состав иксодовых клещей в различных районах Республики Карелия 111
3.2. Обилие и зараженность иксодовых клещей ВКЭ в разных районах Республики Карелия
114
3.3. Реакция клещей на запахи растительного происхождения 117
3.4. Обсуждение 126
ГЛАВА 4. Исследование физиологического состояния и поведения половозрелых иксодовых клещей из природных популяций 129
4.1. Физико-географическая характеристика мест сбора клещей 129
4.2. Физиологический возраст иксодовых клещей в природных популяциях 132
4.3. Чувствительность иксодовых клещей к репелленту ДЭТА 140
4.4. Обсуждение 143
ГЛАВА 5. Размножение вкэ в иксодовых клещах разных видов 145
5.1. Накопление ВКЭ в половозрелых клещах I. ricinus при различных условиях их содержания 147
5.2. Адаптация ВКЭ к острой инфекции при пассировании в иксодовых клещах разных видов 149
5.3. Адаптация ВКЭ к персистентной инфекции в клещах I. ricinus, I. persulcatus и D. reticulatus 155
5.4. Персистентная инфекция ВКЭ в культурах клеток клещей I. ricinus (IRE/CTVM19) и Hyalomma anatolicum anatolicum (HAE/CTVM8) 161
5.5. Обсуждение 168
Заключение 171
Выводы 174
Список литературы 175
